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Para aislarlo de un genoma enorme, generalmente es necesario realizar primero la amplificación, por lo que es necesario construir una biblioteca de genes. En muchos casos, el aislamiento de genes diana es inseparable de las bibliotecas de genes. Además, las bibliotecas de genes también son una base importante para el mapeo genómico complejo. La construcción de bibliotecas de genes incluye los siguientes procedimientos básicos: ① Extracción y fragmentación de ADN, o síntesis de ADNc. ②Selección y preparación del transportista. ③ Conecte el fragmento de ADN o ADNc al vector. ④El recombinante transforma las células huésped. ⑤ Detección de células transformadas. La clonación genética se completa cuando se obtiene una célula huésped que contiene el recombinante. La clonación de genes es sólo la base para el aislamiento de genes. Después de la clonación de genes, los genes clonados deben separarse, es decir, los genes diana se separan de la biblioteca por diversos medios. Para aislar el gen diana es necesario detectarlo y analizarlo, como secuenciación, transcripción y traducción in vitro, experimentos de complementación funcional, etc. A través de estos experimentos se determinó la estructura y función del gen. Sólo así se puede aislar el gen diana. Por lo tanto, la clonación de genes, el aislamiento de genes clonados y la identificación de genes aislados son los contenidos principales de la tecnología de biblioteca de genes para aislar genes diana. 1. Categoría 1 del banco de genes. Bibliotecas genómicas y bibliotecas de ADNc Según los tipos de genes, las bibliotecas de genes se pueden dividir en bibliotecas genómicas y bibliotecas de ADNc. Una biblioteca genómica se refiere a una colección formada cortando todo el ADN genómico de un organismo en fragmentos de ADN de una determinada longitud y clonándolos en determinados vectores. Una biblioteca de ADNc se refiere a una colección de clones formados ligando fragmentos de ADNc de ARNm transcritos en una determinada etapa de desarrollo de organismos con vectores. Las bibliotecas de genomas se dividen en bibliotecas de genomas nucleares, bibliotecas de genomas de cloroplastos y bibliotecas de genomas mitocondriales según la fuente de ADN. La diferencia entre bibliotecas genómicas y bibliotecas de ADNc es que las bibliotecas de ADNc dependen del tiempo. El donante de información en la construcción de bibliotecas es el ARNm total de las células dentro de un cierto tiempo y espacio. Refleja la expresión genética de un determinado tejido (u órgano) de un organismo en un determinado período de desarrollo y en determinadas condiciones ambientales a nivel de transcripción. No puede contener todos los genes de un organismo. En cierto sentido, puede expresar la información funcional del genoma. Además, las bibliotecas de ADNc sólo reflejan la estructura molecular del ARNm. El ADNc no contiene las secuencias espaciadoras ni las regiones reguladoras de los genes eucarióticos, por lo que no es un gen real. Al construir una biblioteca genómica, el donante de información genética es el ADN genómico, por lo que no hay un período de desarrollo ni especificidad de tejido u órgano. Una biblioteca genómica completa contiene todos los clones de las regiones codificantes y no codificantes del ADN genómico. Cada gen de un organismo biológico tiene su clon en la biblioteca, y los fragmentos del gen clonado contienen secuencias espaciadoras, por lo que la biblioteca del genoma realmente puede mostrar toda la información estructural del genoma. En la actualidad, estos dos tipos de bibliotecas de genes se han utilizado eficazmente en ingeniería genética. Cuál elegir depende principalmente del propósito del experimento. Al aislar genes de virus de ARN, estudiar secuencias de proteínas funcionales y aislar genes expresados ​​específicamente en tejidos o etapas de desarrollo específicos, se deben construir bibliotecas de ADNc. Al estudiar secuencias que no están presentes en las moléculas de ARNm y mapear el genoma, es necesario construir bibliotecas de genoma nuclear. 2. Bibliotecas de clones y bibliotecas de expresión Según las funciones de las bibliotecas de genes, se pueden dividir en bibliotecas de clones y bibliotecas de expresión. Las bibliotecas de clones se construyen a partir de vectores de clonación. El vector contiene replicones, múltiples sitios de clonación y marcadores de selección, y los fragmentos clonados pueden propagarse mediante cultivo bacteriano. Utilice vectores de expresión para construir bibliotecas de expresiones. Además de los elementos anteriores, el vector también contiene secuencias que controlan la expresión génica (como promotor, secuencia SD, ATG, terminador, etc.), que pueden expresar el producto codificante del fragmento clonado en células huésped. Los vectores de expresión se pueden dividir en vectores de expresión de proteínas de fusión y vectores de expresión de proteínas naturales. Las sondas de ácido nucleico se utilizan principalmente para aislar clones diana a partir de bibliotecas de clones. Pueden ser sondas de oligonucleótidos sintetizadas a partir de secuencias de proteínas o sondas de secuencias homólogas de la misma especie o género.
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