¿Se pueden construir líneas celulares estables mediante la transfección con el plásmido desactivador del gen crispr cas9?

La transfección de plásmidos con genes knockout puede construir líneas celulares estables

Una es seleccionar líneas celulares monoclonales estables después de la transfección de liposomas y la otra es utilizar retrovirus, transfección lentiviral y detección de células estables. líneas.

Transfección con lipofectamina: 24 horas después de la transfección, digerir las células y contarlas en una placa de 96 pocillos, asegurándose de que cada pocillo tenga de 2 a 3 células, para obtener una sola. clonar. Después de que las células se adhieren a la pared, se agregan antibióticos para la detección. El tiempo de detección y la concentración dependen de las células. Generalmente, el G418 actúa durante una semana y la puromicina tarda de 2 a 3 días. El método de liposomas requiere mucho tiempo para detectar monoclones y la eficiencia es baja, alrededor de sólo el 1 %.

Transfección viral: primero, se utilizan células empaquetadoras, generalmente 293 células, para empaquetar el virus, y luego el El virus se utiliza para la transfección. Infecta las células objetivo. El virus empaquetado depende de diferentes tipos de virus y, por lo general, tarda de 3 a 5 días. Se debe medir el título del virus empaquetado y la cantidad de virus que se transfectará en el objetivo. Las células se determinan en función del título. Transfección de las células diana 1. Después de 2 días, se agregan antibióticos para detectar y se obtiene una línea celular estable.

La eficiencia de la transfección viral para obtener una línea celular estable. Es alto, pero los pasos son engorrosos.