¿Cuáles son los métodos de separación y purificación de proteínas más utilizados? ¿Cuál es el principio de acción de cada uno?
Diversos métodos para separar mezclas de proteínas se basan principalmente en las siguientes propiedades de las proteínas en solución: 1) tamaño molecular; 2) solubilidad; 4) propiedades de adsorción; 5) efectos biológicos sobre otras moléculas; Sepárelos aprendiendo por afinidad, etc.
Los métodos comunes para separar y purificar proteínas son: 1. Salado y precipitación con disolventes orgánicos: añadir una gran cantidad de sal neutra a la solución de proteínas para destruir las propiedades coloidales de la proteína y precipitar la proteína del solución. Se llama salazón. Las sales neutras de uso común incluyen: sulfato de amonio, cloruro de sodio, sulfato de sodio, etc. Al salar, el pH de la solución funciona mejor en el punto isoeléctrico de la proteína. Cualquier disolvente orgánico que pueda mezclarse con agua en cualquier proporción, como etanol, metanol, acetona, etc., puede provocar la precipitación de proteínas. 2. Electroforesis: Las moléculas de proteínas llevan una carga neta negativa o positiva en soluciones superiores o inferiores a su pI, por lo que pueden moverse en un campo eléctrico. La movilidad electroforética depende principalmente de la cantidad de carga de las moléculas de proteína y del tamaño de las moléculas. 3. Método de diálisis: las propiedades de ultrafiltración de la membrana de la bolsa de diálisis se pueden utilizar para separar sustancias moleculares grandes de sustancias moleculares pequeñas. 4. Cromatografía: La separación se realiza aprovechando las diferencias en las propiedades físicas y químicas de los componentes de la mezcla y las diferentes distribuciones entre las dos fases en contacto entre sí (fase estacionaria y fase móvil). Existen principalmente cromatografía de intercambio iónico, cromatografía en gel, cromatografía de adsorción y cromatografía de afinidad, entre las cuales la cromatografía en gel se puede utilizar para determinar el peso molecular de las proteínas. 5. Tamiz molecular: también conocido como método de filtración en gel, la solución de proteína se agrega en la parte superior de la columna y se deja filtrar hacia abajo. Las proteínas de moléculas pequeñas ingresan a los poros, por lo que permanecen en la columna durante mucho tiempo, y las moléculas grandes. Las proteínas no pueden entrar en los poros y salir directamente, por lo que las proteínas de diferentes tamaños se separan. 6. Ultracentrifugación: Aprovechando la diferencia de densidad de las sustancias, luego de la ultracentrifugación, se distribuyen en diferentes capas líquidas para su separación. La ultracentrifugación también se puede utilizar para determinar el peso molecular de las proteínas. El peso molecular de una proteína es directamente proporcional a su coeficiente de sedimentación S.