Métodos comunes de electroforesis
Los métodos de electroforesis comunes en el laboratorio incluyen los siguientes:
1. Electroforesis en papel
Se refiere al método de electroforesis que utiliza papel de filtro como soporte. Fue la electroforesis zonal más antigua utilizada.
Colocar la tira de papel de filtro en posición horizontal entre dos recipientes que contienen solución tampón, y colocar la muestra en el centro del papel de filtro. Cuando el tampón humedezca la tira de papel de filtro, cúbrala con una cubierta de sellado aislante y luego la fuente de alimentación de electroforesis puede ingresar voltaje de CC (100 V ~ 1000 V) para la electroforesis.
2. Electroforesis de película de acetato de celulosa
Se pueden obtener resultados de separación satisfactorios mediante el pretratamiento de la membrana, la adición de muestras, la electroforesis, el teñido, la decoloración y la transparencia durante la electroforesis. Las características de esta electroforesis son una rápida velocidad de separación, un corto tiempo de electroforesis y un pequeño consumo de muestra. Por lo tanto, es particularmente adecuado para la detección de trazas de proteínas anormales en condiciones patológicas.
3. Electroforesis en gel
Método de electroforesis derivado de la electroforesis zonal utilizando sustancias en gel como soporte.
La electroforesis en gel de agarosa y la electroforesis en gel de poliacrilamida son las dos formas más utilizadas de electroforesis general.
Actualmente, este método es muy utilizado para analizar proteínas y ácidos nucleicos.
IV.Electroforesis por enfoque isoeléctrico
1. Proceso de electroforesis por enfoque isoeléctrico
Una tecnología de electroforesis que utiliza un medio con un gradiente de pH para separar proteínas con diferentes puntos isoeléctricos.
La separación se lleva a cabo en una solución de gradiente de pH lineal estable y continuo (electrolito portador anfifílico). Cada sustancia anfótera separada se mueve a una posición de pH consistente con su punto isoeléctrico. Allí no hay más movimiento (llamado enfoque). ).
2. Características de la electroforesis de enfoque isoeléctrico
Utilice un electrolito portador anfótero para formar un gradiente de pH lineal, continuo y estable entre los electrodos;
Debido al "efecto de enfoque", incluso las muestras pequeñas son claras y también se pueden obtener distintas interfaces de zona;
La velocidad de electroforesis es rápida; la resolución es alta;
La posición donde se agrega la muestra se puede seleccionar arbitrariamente;
Puede usarse para determinar el punto isoeléctrico de sustancias proteicas;
Es adecuado para la separación y análisis de componentes biológicos de peso molecular medio y grande (como proteínas, péptidos, isoenzimas, etc.) .
5. Isotacforesis
Utilice dos electrolitos de diferentes concentraciones, uno es el electrolito líder, que llena toda la columna capilar; el otro es el electrolito de cola, que se coloca en un extremo; de la electroforesis en el canal. La movilidad del electrolito principal es mayor que la de cualquier componente de la muestra, y la del electrolito posterior es menor que la de cualquier componente de la muestra. Los componentes separados se intercalan en el medio según sus diferentes movilidades. En un campo eléctrico, cada componente separado se mueve en el espacio entre el electrolito principal y el electrolito final para lograr la separación.
6. Electroforesis en gel bidimensional (electroforesis bidimensional)
La primera dimensión utiliza el enfoque isoeléctrico para separar proteínas según los diferentes PI de cada proteína en componentes proteicos complejos.
La segunda dimensión utiliza electroforesis en gel de dodecilsulfato de sodio-poliacrilamida (SDS-PAGE), que separa las proteínas en dirección vertical según su peso molecular. El resultado ya no es una banda, sino que aparece en puntos.
7. Inmunoelectroforesis
La inmunoelectroforesis es una combinación de electroforesis en placa de agar e inmunodifusión de dos fases. La muestra de antígeno se somete primero a electroforesis en una placa de agar para separar los distintos componentes entre sí debido a las diferentes movilidades electroforéticas; luego se añaden anticuerpos para la inmunodifusión bifásica y los componentes del antígeno y los anticuerpos separados se difunden en el agar. Forman un arco de precipitación visible a simple vista donde las proporciones son adecuadas.