Principio de detección de proteínas mediante reactivo biuret
Se obtiene basándose en principios experimentales. La proteína reacciona con iones de cobre divalentes en condiciones alcalinas para generar sustancias de color púrpura, de modo que se puede detectar el contenido de proteína.
El verdadero papel del reactivo de biuret es el sulfato de cobre, mientras que el hidróxido de potasio es solo el de proporcionar un ambiente alcalino. Por lo tanto, cuando utilice reactivo de biuret, primero debe agregar 0,1 g/ml de solución de hidróxido de sodio y luego agregar 0,01 g/ml de solución acuosa de sulfato de cobre.
Si primero se agrega la solución de sulfato de cobre y luego la solución de hidróxido de sodio, no se puede crear completamente el ambiente alcalino. En este momento, el sulfato de cobre sufrirá una reacción de metátesis con hidróxido de sodio para formar un. precipitado de hidróxido de cobre azul. Como resultado, el fenómeno no está claro y el propósito experimental no se puede lograr mejor.
Información ampliada
El método biuret es el primer método que utiliza la colorimetría para determinar la concentración de proteínas. El sulfato de amonio no interfiere con el desarrollo del color, el enlace peptídico entre el Cu y las proteínas y la caseína. Los residuos de aminoácidos se complejan para formar un complejo azul púrpura, que tiene una absorción máxima a una longitud de onda de 540 nm.
El método biuret se utiliza a menudo para la determinación de soluciones proteicas con un contenido de 0,5 g/L ~ 10 g/L.
Principio experimental
El bisuret (NH?CONHCONH?) es un producto que se obtiene calentando dos moléculas de urea a unos 180°C para liberar una molécula de amoniaco. En soluciones alcalinas fuertes, el biuret forma un complejo violeta con iones de cobre divalentes. Cualquier compuesto con dos grupos amida o dos enlaces peptídicos conectados directamente, o un enlace peptídico que pueda conectarse con un átomo de carbono intermedio, tiene una reacción de biuret.
El color del complejo morado es proporcional a la concentración de proteínas y no tiene nada que ver con el peso molecular de las proteínas ni con la composición de aminoácidos, por lo que puede utilizarse para determinar el contenido de proteínas. Las principales sustancias que interfieren con esta determinación incluyen: sulfato de amonio, tampón Tris y ciertos aminoácidos.
Las ventajas de este método son que es más rápido, diferentes proteínas producen tonos de color similares y hay pocas sustancias que interfieran. La principal desventaja es su escasa sensibilidad y no es adecuado para la determinación de trazas de proteínas.
Enciclopedia Baidu: reactivo Bisuret