Principios de la cromatografía de permeación en gel
El principio de la cromatografía de permeación en gel es el siguiente:
La cromatografía en gel también se denomina cromatografía de exclusión espacial. Es un método que utiliza ciertos geles para separar y analizar los componentes de una mezcla debido a sus diferentes pesos moleculares y diferentes efectos de retardo. El principio de separación de la cromatografía en gel es diferente de otros métodos de cromatografía. Es similar a la función de los tamices moleculares, pero el tamaño de los poros del gel es mucho mayor que el de los tamices moleculares y generalmente oscila entre cientos y miles de angstroms.
La columna cromatográfica se rellena de gel con orificios de un tamaño determinado. Cuando la muestra ingresa a la columna cromatográfica, las moléculas de muestra de diferentes tamaños fluyen con la fase móvil a lo largo de los espacios externos de las partículas de gel y alrededor de los poros del gel. Las moléculas con un volumen mayor quedan excluidas porque no pueden penetrar en los poros del gel. fluye más suavemente y la fase móvil lo elimina temprano a través de la columna de gel. Las moléculas de volumen medio producen una penetración parcial.
Pequeñas moléculas pueden penetrar en los poros del gel y bloquearse, para luego ser eliminadas por la fase móvil debido a un proceso de equilibrio. De esta manera, los componentes de la muestra se bloquean básicamente según diferentes tamaños moleculares y salen sucesivamente de la columna cromatográfica, logrando así el propósito de separación.
La cromatografía en fotogel utiliza una solución acuosa como fase móvil, lo que se denomina cromatografía en gel de filtración (HFC), y cuando se utilizan disolventes orgánicos como fase móvil, se denomina cromatografía de permeación en gel (GPC). La separación de GPC utiliza el mecanismo de exclusión de volumen. Se llena con gel o partículas porosas. El tamaño de los poros es similar al de las moléculas de polímero que se van a separar.
El primero en fluir entre las partículas de gel, el volumen de elución (tiempo) es el más pequeño y los polímeros se dilucidan en orden de mayor a menor en peso molecular. De esta forma, realizando una curva estándar de polímeros con pesos moleculares conocidos, se pueden analizar compuestos poliméricos desconocidos de la misma serie a medir.