Secuencias de genes no disponibles en el NCBI
Tras la obtención del ADNc se sintetizan las dobles hebras.
Diseño de cebadores (cebadores degenerados) basados en la secuencia genética de especies homólogas.
Amplificar el fragmento diana mediante PCR (se puede utilizar PCR anidada para aumentar la especificidad)
Corte, recuperación y purificación del caucho
Ligación y transfección del vector plasmídico
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Secuenciación de recombinantes obtenidos mediante screening
Tras obtener la secuencia del gen, se vuelven a diseñar cebadores en función de la secuencia.
Realización de carreras de 3 y 5 pies
La resecuenciación confirmó el gen de longitud completa.
Análisis funcional de genes mutantes de Arabidopsis
Este es el proceso experimental de una tesis doctoral realizada por uno de mis compañeros.
Lo que estamos haciendo es una clonación homóloga de una especie de árbol.