Explicación de términos de hibridación molecular
La hibridación molecular se refiere a la hibridación de dos tipos diferentes de ácidos nucleicos (normalmente ADN) entre sí in vitro para formar una nueva molécula de doble cadena.
Expansión de datos:
Diferentes fragmentos de ADN, fragmentos de ADN y fragmentos de ARN también pueden renaturalizarse para formar otros nuevos si sus secuencias de nucleótidos son complementarias en estructura de doble hélice. Este proceso de combinar dos polinucleótidos imperfectamente complementarios según un apareamiento de bases complementarias se denomina hibridación molecular.
La hibridación molecular es una técnica para determinar la secuencia de bases de un ácido nucleico monocatenario. El principio básico es que el ácido nucleico monocatenario que se va a analizar y el ácido nucleico monocatenario de secuencia conocida (llamado sonda) forman un fragmento de doble hélice detectable mediante el emparejamiento de bases. Esta tecnología se puede realizar entre ADN y ADN, ARN y ARN, o ADN y ARN, formando diferentes tipos de moléculas híbridas como ADN-ADN, ARN-ARN o ARN-ADN.
Tecnología de hibridación molecular:
Los fragmentos de ADN o ARN conocidos utilizados como sondas tienen generalmente de 30 a 50 nucleótidos de longitud y pueden sintetizarse químicamente o extraerse directamente de células específicas de ARNm. Las sondas deben estar preetiquetadas para detectar moléculas hibridadas. Existen muchos métodos de etiquetado, los más utilizados son el etiquetado con isótopos y el etiquetado con biotina. Los métodos de hibridación se pueden dividir en hibridación en fase líquida e hibridación en fase sólida.
Tecnología que combina una molécula de ADN o ARN monocatenaria con otro fragmento de ADN o ARN con bases complementarias para formar una molécula bicatenaria. Es decir, la hibridación entre moléculas de ácido nucleico. En ocasiones las dos moléculas de ácido nucleico que se hibridan entre sí no son del todo idénticas, pero debe existir una cierta correlación. Ya en 1961 alguien creó la hibridación molecular entre ADN y ARN, pero no fue hasta la década de 1970 que se convirtió en una tecnología de análisis importante en el análisis genético, capaz de identificar la especificidad de los genes.
Por ejemplo, un fragmento de ADN de un determinado gen con una determinada secuencia conocida se puede marcar con un nucleido radiactivo para formar una sonda de ácido nucleico, que se puede combinar con el gen defectuoso mediante hibridación molecular para generar un señal de hibridación, con lo que se revelan los genes defectuosos, lo que permite el diagnóstico prenatal de muchas enfermedades genéticas. La tecnología de hibridación molecular de ácidos nucleicos se utiliza ahora para diagnosticar la hepatitis B, así como para estudiar otras enfermedades virales y la estructura genética de los tumores cancerosos (oncogenes).
El método de hibridación de moléculas de ácido nucleico no es complicado. Antes de la hibridación, el ADN que se va a analizar se calienta o se agrega álcali para desnaturalizarlo y separarlo en hebras simples, luego se agrega una sonda de ácido nucleico marcada con radionúclidos y se baja la temperatura y se hibrida para obtener una doble cadena marcada con radionúclidos; molécula híbrida.