¿Cuáles son los métodos de separación y purificación?
Los métodos de separación y purificación incluyen cristalización y recristalización, destilación y enfriamiento, filtración, sublimación, extracción, disolución, adición, absorción y transformación.
Extensión de datos:
La separación y purificación es el proceso de separar una mezcla de polisacáridos en polisacáridos individuales. Los métodos comunes para la separación y purificación de proteínas incluyen intercambio iónico, tamices moleculares, cromatografía hidrófoba, cromatografía de afinidad, etc.
Separación y purificación de proteínas:
La separación y purificación de proteínas es un proceso de separación de proteínas mediante cromatografía de afinidad. Los métodos de separación incluyen diálisis, ultrafiltración, filtración en gel, cromatografía de intercambio iónico y baja temperatura. precipitación de disolventes orgánicos, etc.
Método de separación basado en la especificidad del ligando - cromatografía de afinidad:
La cromatografía de afinidad es un método extremadamente eficaz para separar proteínas. A menudo se puede separar una determinada proteína a purificar de una muy compleja. Mezcla de proteínas de alta pureza en un solo paso. Este método se basa en la unión específica y no valente de determinadas proteínas a otra molécula llamada ligando.
El principio básico: Las proteínas existen en mezclas complejas en los tejidos o células. Cada tipo de célula contiene miles de proteínas diferentes, por lo que la separación (Separación), purificación e identificación (Caracterización) de proteínas es una parte importante de la bioquímica. Hasta el momento, no existe un método único o ya preparado que pueda extraer cualquier tipo de proteína a partir de proteínas mixtas complejas, por lo que a menudo se utilizan varios métodos en combinación.
Método de electroforesis:
Se pueden separar varias proteínas en las mismas condiciones de pH debido a la diferente movilidad en el campo eléctrico debido a los diferentes pesos y cargas moleculares. Lo que merece atención es la electroforesis por enfoque isoeléctrico, que utiliza un electrolito anfótero como portador. Durante la electroforesis, el electrolito anfótero forma un gradiente de pH que aumenta gradualmente desde el electrodo positivo al electrodo negativo. Cuando nadan en él proteínas con una determinada carga. alcanzan sus respectivas concentraciones isoeléctricas. La posición del pH del punto eléctrico se detiene. Este método se puede utilizar para analizar y preparar diversas proteínas.
Cromatografía de intercambio iónico:
Los intercambiadores iónicos incluyen intercambiadores catiónicos (como carboximetilcelulosa; CM-celulosa) e intercambiadores aniónicos (dietilaminoetilcelulosa; DEAE?FONT FACE="宋体">Celulosa ), cuando la solución de proteína separada fluye a través de la columna de cromatografía de intercambio iónico, la proteína con la carga opuesta a la del intercambiador de iones se adsorbe en el intercambiador de iones. La proteína adsorbida luego se eluye cambiando el pH o la fuerza iónica.