¿Cuáles son los reactivos utilizados para la amplificación por PCR?
Reactivos utilizados en la amplificación por PCR:
Pasos de amplificación por PCR:
1. ¿Extracción de ADN cromosómico bacteriano (ver grupo anterior)?
2. Configuración del sistema de reacción RAPD (en la foto de arriba)
3·Procedimiento de reacción: agregue el reactivo de reacción RAPD en el tubo EP y mezcle suavemente, luego cubra la mezcla de reacción con 100 ul de aceite de parafina para evitar que la muestra se calentado repetidamente - Evaporar mientras se enfría, cubrir con una tapa.
¿Abrir el reactor PCR e introducir los siguientes datos de reacción?
· ?¿Predesnaturalización a 94 grados centígrados durante 5 minutos?
· ?Degeneración a 94 ¿grados Celsius durante 40 segundos?
·? ¿Recocido a 40 grados Celsius durante 40 segundos?
·? ¿Extensión a 72 grados Celsius durante 1 minuto?
Poner el tubo EP en el instrumento para iniciar la amplificación, realice un ciclo 35 veces; extienda a 72 grados Celsius durante 10 minutos
p>Notas:
1. utilizado en el sistema de reacción de PCR es muy pequeño. Se debe prestar estricta atención a la precisión de la cantidad de muestra y a colocar todas las muestras en el sistema de reacción. ?
2. Para evitar la contaminación, todas las puntas, los tubos de centrífuga y el agua destilada utilizados en las reacciones de PCR deben esterilizarse; reemplace cada reactivo con una punta esterilizada nueva. ?
3. Al agregar reactivos, agregue primero agua destilada y finalmente agregue la plantilla de ADN y la ADN polimerasa Taq. ?
4. Antes de configurar la máquina de PCR para la reacción de PCR, el tubo de PCR debe estar bien tapado; de lo contrario, el líquido se evaporará y afectará la reacción de PCR. ?
5. Condiciones del cebador: Primero, las secuencias del cebador y la plantilla deben ser estrechamente complementarias. En segundo lugar, evitar la formación de dímeros estables o estructuras en horquilla entre los cebadores. -sitios objetivo en la plantilla de polimerización del ADN (es decir, falta de coincidencia).