¿Se unirán los anticuerpos de etiqueta de bandera a proteínas endógenas?
Los anticuerpos de etiqueta de bandera se unirán a proteínas endógenas
El sistema de etiqueta de bandera es un sistema de expresión reconocido para la expresión, purificación y detección de proteínas de fusión, y se usa ampliamente en transferencias Western, células inmunes. histoquímica, inmunoprecipitación, citometría de flujo, purificación de proteínas, interacción de proteínas, separación de proteínas y otros campos de investigación. La etiqueta de bandera es un fragmento de polipéptido compuesto por 8 aminoácidos hidrófilos (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys) fusionados a la proteína recombinante. La etiqueta FLAG sólo consta de 8 aminoácidos, por lo que no ocupará otros epítopos y dominios de unión, evitando así cambios en la función, secreción y transporte de la proteína de fusión. Debido a su naturaleza hidrófila, la etiqueta FLAG tiende a colocarse en la superficie de la proteína de fusión, lo que facilita su unión a los anticuerpos y su digestión por la enteroquinasa.
Debido a que la etiqueta Flag puede ubicarse en el extremo C o N de una proteína, este sistema se ha utilizado en una variedad de tipos de células, incluidas bacterias, levaduras y células de mamíferos. Dado que las condiciones de purificación del sistema de etiquetas Flag no son desnaturalizantes, se pueden purificar todas las proteínas de fusión activas. El anticuerpo monoclonal Anti-Flag Tag de EarthOx se puede utilizar para detectar la expresión y localización intracelular de proteínas de expresión de fusión de etiquetas Flag, así como para purificar, detectar cualitativa o cuantitativamente proteínas de expresión de fusión Flag, etc. Por ejemplo, en experimentos IF de inmunofluorescencia, combinados con el anticuerpo secundario fluorescente Dylight 549 de EarthOx, este anticuerpo se puede utilizar para localizar con precisión la ubicación de la proteína de expresión de fusión Flag en la célula (que se muestra en rojo en la figura). Además, antes de realizar el análisis de expresión de fusión, también es un paso muy importante obtener la proteína de expresión de fusión Flag mediante tecnología de inmunoprecipitación. Por lo tanto, también es necesario seleccionar un anticuerpo etiqueta Flag adecuado que pueda usarse para inmunoprecipitación (IP). de. El anticuerpo monoclonal Anti-Flag Tag de EarthOx no solo se puede utilizar en experimentos IF de localización intracelular, sino también en experimentos IP. La proporción de dilución experimental IP de 1:200 o incluso superior también muestra que el anticuerpo en sí tiene una alta potencia. Al mismo tiempo, debido a que es un anticuerpo monoclonal, la especificidad también es alta. La alta relación de dilución correspondiente a la alta potencia también significa un rendimiento de costos ultra alto.