¿Cuál es la diferencia entre RTPCR y PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real?
La diferencia entre la rtPCR y la PCR cuantitativa por fluorescencia en tiempo real es la siguiente:
1. La denominada PCR debería ser la PCR más convencional, que utiliza el ADN como plantilla y utiliza cebadores ascendentes y descendentes para amplificar el aumento de ADN.
2. RT-PCR generalmente se refiere a PCR de transcripción inversa, aunque alguna información dice que la PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real también se conoce como RT-PCR. Pero esto es incorrecto y no se recomienda.
El proceso operativo básico consiste en transcribir inversamente el ARN extraído y luego utilizar el ADNc obtenido como plantilla para diseñar cebadores para la amplificación. Es un método común para detectar la expresión génica.
3. La PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real es la PCR en tiempo real. Su principal función es detectar la concentración inicial de ADN en la muestra.
En cuanto a la relación entre los tres, la RT-PCR y la PCR cuantitativa en tiempo real deben pertenecer a la PCR. En experimentos de ARN, se aplicarán ambas.
Por ejemplo, si desea comparar la diferencia de expresión de un determinado gen en dos tejidos, primero debe extraer el ARN total de los dos tejidos y luego usar RT-PCR para detectar si el gen se expresa en los dos tejidos. Luego se utilizó la PCR cuantitativa en tiempo real para determinar si había una diferencia significativa en la expresión del gen en los dos tejidos.
Principio de PCR:
La replicación semiconservadora del ADN es una forma importante de evolución y generación biológica. El ADN bicatenario puede desnaturalizarse y desenrollarse en hebras individuales bajo la acción de diversas enzimas. Con la participación de la ADN polimerasa, puede copiarse en dos copias moleculares idénticas según el principio de apareamiento de bases complementarias.
En experimentos, se descubrió que el ADN puede desnaturalizarse y descomprimirse a altas temperaturas, y puede renaturalizarse en dobles hebras cuando se reduce la temperatura. Por lo tanto, al controlar la desnaturalización y renaturalización del ADN mediante cambios de temperatura, agregando cebadores diseñados, ADN polimerasa y dNTP, se puede completar la replicación in vitro de genes específicos.
Sin embargo, la ADN polimerasa estará inactiva a altas temperaturas, por lo que se debe añadir nueva ADN polimerasa para cada ciclo, lo que no sólo es engorroso de operar, sino también costoso, lo que restringe la aplicación y el desarrollo de la PCR. tecnología.