Tres pasos de la PCR
Los tres pasos de la PCR son los siguientes:
1. Desnaturalización: el ADN bicatenario se convierte en dos ADN monocatenario en condiciones de alta temperatura (90~95 ℃), que sirven. como plantilla para la replicación del ADN. ;
2. Recocido: el ADN monocatenario es complementario al cebador a una temperatura más baja F (37-60 °C) para formar una estructura híbrida de doble cadena;
3. Extensión: calentando a 70~75°C, los cebadores en la plantilla unida se extienden en la dirección 5' → 3' bajo la catálisis de la ADN polimerasa termoestable para sintetizar ADN plantilla no hebrado.
Introducción a la PCR:
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una tecnología de biología molecular que se utiliza para amplificar fragmentos específicos de ADN. Puede considerarse como una replicación biológica especial del ADN in vitro. La característica más importante de la PCR es que puede aumentar en gran medida trazas de ADN.
Por lo tanto, ya sean criaturas antiguas en fósiles, restos de personajes históricos o el cabello, la piel o la sangre que dejó el asesino en un caso de asesinato hace décadas, siempre que un poco de ADN pueda aislarse, se puede utilizar PCR para amplificar y comparar. Aquí es donde radica el poder de las “pruebas de rastreo”.
La idea fue propuesta por primera vez por Mullis en Estados Unidos en 1983. En 1985 inventó la reacción en cadena de la polimerasa, un método sencillo de amplificación del ADN, que supuso el verdadero nacimiento de la tecnología PCR. A partir de 2013, la PCR se ha convertido en la tecnología de tercera generación. En 1976, el científico chino Qian Jiayun descubrió la ADN polimerasa estable Taq e hizo una contribución fundamental al desarrollo de la tecnología de PCR.
La PCR utiliza el ADN para desnaturalizarlo en una sola cadena a una temperatura alta de 95 °C in vitro. A baja temperatura (generalmente alrededor de 60 °C), los cebadores se combinan con la cadena simple según el principio. del apareamiento de bases complementarias, y luego se ajusta cuando la temperatura alcanza la temperatura de reacción óptima de la ADN polimerasa (alrededor de 72 °C), la ADN polimerasa sintetiza hebras complementarias en la dirección del fosfato al azúcar de cinco carbonos (5'-3').
Una máquina de PCR basada en polimerasa es en realidad un dispositivo de control de temperatura que puede controlar bien la temperatura de desnaturalización, la temperatura de renaturalización y la temperatura de extensión.