Método de extracción de ADN
La extracción de ADN se realiza principalmente mediante el método CTAB. Otros métodos incluyen métodos físicos como el método de cuentas de vidrio, el método ultrasónico, el método de molienda y el método de congelación y descongelación. Métodos químicos como el método del isotiocianato de guanidina y el método de lisis alcalina. Métodos biológicos: métodos enzimáticos.
1. Método de extracción con fenol: primero use eggase K y SDS para romper las células, digerir la proteína y luego extraer con fenol y fenol-cloro. Después de una centrifugación a alta velocidad, se toma el sobrenadante. El tamaño del ADN es de 100-150 kb.
2. Método de despolimerización de formamida: rompa las células como se indica arriba, luego use formamida de alta concentración para despolimerizar la combinación de proteína y ADN, y luego dialice para obtener ADN de aproximadamente 200 kb.
3. Método de bobinado con varilla de vidrio: utilice clorhidrato de guanidina para lisar las células, extienda el lisado sobre etanol, luego agite suavemente la interfaz con un gancho o una varilla de vidrio en forma de U y envuelva el precipitado de ADN alrededor del vidrio. vara. Genera ADN de aproximadamente 80kb.
4. Método de precipitación con alcohol isopropílico: Básicamente igual que el método 1, solo que usando el doble del volumen de alcohol isopropílico en lugar de etanol, se puede eliminar el ARN de molécula pequeña (soluble en alcohol isopropílico).
5. Método de preparación rápida del surfactante: use el surfactante TritonX-100A o NP40 para alterar las células, luego use proteinasa K o fenol para eliminar proteínas, precipitación con etanol o diálisis.
6. Preparación rápida mediante método de calentamiento: calentar a 96 ℃ -100 ℃ durante cinco minutos, luego centrifugar y tomar el sobrenadante, que se puede utilizar para la reacción de PCR.
7. Preparación rápida de la desnaturalización alcalina: primero utilizar NaOH durante 20 minutos, luego neutralizar con HCl, centrifugar y tomar el sobrenadante, que contiene una pequeña cantidad de ADN.