La tecnología de anticuerpos monoclonales de Kohler y Milstein en 1975 marcó el comienzo de una nueva era en la producción y uso de anticuerpos, como se muestra en la figura.

(1) El proceso de preparación de anticuerpos monoclonales debe utilizar primero el método de fusión de células animales para fusionar linfocitos B y células de mieloma, luego utilizar tecnología de cultivo de células animales para detectar las células fusionadas, descartar las células de hibridoma y luego cultivarlas.

(2) Las células A de la imagen son linfocitos B inmunes, que no tienen capacidad de dividirse, pero pueden secretar anticuerpos específicos. Las células B son células de mieloma que pueden proliferar indefinidamente.

(3) Los métodos de fusión de células animales comúnmente utilizados incluyen métodos físicos (centrifugación, vibración y estimulación eléctrica), métodos químicos (PEG) y métodos biológicos (virus inactivados).

(4)El medio HAT es un medio selectivo. Puede haber tres resultados de la fusión celular: células de autofusión de linfocitos B, células de autofusión de células de mieloma y células de hibridoma. Por lo tanto, es necesario utilizar medio HAT para detectar células de hibridoma. La insulina puede acelerar la absorción y utilización de glucosa por las células de los tejidos, por lo que durante el cultivo celular, a menudo se agrega insulina al medio de cultivo.

(5) Después de 2 semanas de cultivo, las células de mieloma que pueden producir anticuerpos específicos se seleccionan y cultivan en diferentes pocillos. Antes de esta operación, las células cultivadas se deben diluir a 7 ~ 10 células/ml y se deben agregar 0,1 ml de diluyente celular a cada pocillo para garantizar que no haya más de una célula por pocillo para lograr el propósito del cultivo de células individuales. y asegurar la pureza del anticuerpo.

(6) Para obtener una gran cantidad de anticuerpos monoclonales, se pueden inyectar células de hibridoma en la cavidad abdominal de ratones para cultivo in vivo, o se puede utilizar tecnología de cultivo de células animales para cultivo in vitro.

Entonces la respuesta es:

(1) Fusión de células animales

(2) Secreción de anticuerpos específicos y proliferación ilimitada

( 3) ¿PEG (virus inactivado, estimulación eléctrica)?

(4)¿Hybridoma? La insulina

(5) secreta específicamente anticuerpos anti-proteína X para garantizar que no haya más de una célula en cada pocillo, logrando así el propósito del cultivo monoclonal (el cultivo de células individuales garantiza la pureza del anticuerpo).

( 6) In vitro o in vivo (in vitro e in vivo, in vitro e in vivo)