Métodos para detectar grupos tiol
Columna Kromasil-C18 (250 × 4,6 mm, 5 micrones), fase móvil A (0,1TFA), fase móvil B (metanol) elución en gradiente: la fase móvil B es 40 ~ 80 , 0 ~105 min, luego retener 80 B. Curva estándar NTB y=3,67059x 0,14123, tasa de recuperación 101,9, RSD=1,17, estableciendo así un método de detección de tiol altamente sensible.
2. Utilizando espectroscopia de fluorescencia molecular como condición de reacción, utilice el método de elución en gradiente de cromatografía líquida de alto rendimiento de fase inversa para determinar los grupos sulfhidrilo.
Se hicieron reaccionar OPA, cloruro de dansilo y ninhidrina con cisteína y se midieron sus espectros de absorción ultravioleta visible y sus espectros de fluorescencia. La fluorescencia se midió mediante la reacción de OPA con cisteína en diferentes condiciones de pH, temperatura y tiempo de reacción. Pipetear 0, 20, 40, 60, 80 y 100 μL de solución de cisteína 0,1 mmol/L respectivamente, agregar 10 μl de H2O2 respectivamente, reaccionar a temperatura ambiente durante 30 min, luego calentar y evaporar, el residuo se diluye a 5 ml. con 200 μl de solución de derivado de OPA y medir el espectro de fluorescencia a los 4 minutos. Tome 5 l de solución tampón de ácido bórico con pH 8,4 y mézclelo 10 veces, agregue 2 l de solución de derivatización de OPA y mezcle la muestra para HPLC. Condiciones de gradiente: la proporción del eluyente B es 0 a los 0 minutos, aumenta linealmente a 60 a los 17 minutos, aumenta linealmente a 100 a los 17,5 minutos y la elución finaliza a los 20 minutos. La longitud de onda de excitación es de 340 nm y la longitud de onda de detección de fluorescencia es de 450 nm.
3. Método de detección HPLC-UV de derivatización previa a la columna
La tris(2-carboxietil)-fosfina (TCEP) es el agente reductor, 7-fluorobenceno-2-OXA-1. Se usó ,3-oxadiazol-4-sulfonato (SBD-F) como agente de derivatización, N-acetilcisteína como estándar interno y la fase móvil fue metanol. El rango lineal es 8,3 ~ 1042,6 μ mol/L y el límite de detección más bajo es 0. La precisión intradiaria es de 1,67 ~ 1,86, la precisión interdiaria es de 2,08 ~ 3,06 y la tasa de recuperación promedio es 90.
4. Desorción electroquímica combinada con tecnología de fluorescencia.
La muestra se fijó sobre la superficie de un electrodo de oro modificado con una película autoensamblada de alquiltiol y se marcó GSH in situ mediante la reacción entre el reactivo fluorescente maleimida y los grupos tiol libres. El adsorbato en la superficie del electrodo se desorbe a un potencial constante y se detecta la intensidad de fluorescencia del material desorbido en una solución de KOH de 0,1 mol·L.