Se ha resuelto cómo diseñar cebadores basados ​​en la secuencia conocida del gen PRL animal.

2. Diseño del cebador en sentido ascendente: seleccione una secuencia genética 5'-3' de aproximadamente 23 pb en la dirección directa y cópiela y agregue su sitio de restricción en sentido ascendente (generalmente 6 pb) al extremo 5' de esta secuencia, y luego agregue dos. dígitos delante de él. Cualquier base se utiliza como base protectora; la secuencia es: base protectora (2 pb) sitio de restricción aguas arriba (6 pb) secuencia inicial del gen 5'-3', y la longitud total de las bases del cebador es de aproximadamente 28-30 pb. .

3. Diseño del cebador aguas abajo: la secuencia de la cadena complementaria se obtiene mediante complementación de secuencias. La secuencia del gen 5'-3' tiene aproximadamente 20 pb, y se añaden sitios de restricción y bases protectoras aguas abajo en el extremo 5'. En términos generales, es necesario agregar un codón de parada entre el sitio de restricción y el gen. La secuencia es: base protectora (2 pb) sitio de restricción aguas abajo (6 pb) codón de parada (3 pb) secuencia inicial de 5'-3' del gen secuencia complementaria, y la longitud total de la base del cebador es de aproximadamente 28-30 pb.

4. Verifique: (1) Longitud del cebador; (2) Si el sitio de restricción aguas arriba está desplazado. Si es así, agregue 1-2 bases para restaurar el marco de lectura. El codón no está diseñado, también debe probar si se produce un cambio de marco y si la PCR se puede terminar con éxito. (4) La temperatura de hibridación de un par de cebadores no puede ser muy diferente; de ​​lo contrario, las bases deben ajustarse para cumplir con los requisitos.