¿La hibridación in situ y la hibridación de ácidos nucleicos son lo mismo?
El método de hibridación de ácidos nucleicos es una técnica estándar en biología molecular, que se utiliza para detectar secuencias específicas (secuencias objetivo) de moléculas de ADN o ARN. El método clásico de hibridación de ácidos nucleicos consiste en transferir y fijar primero el ADN o el ARN. En una membrana de nitrocelulosa o nailon, la sonda complementaria de ADN o ARN monocatenario se marca de forma radiactiva o no radiactiva. Cuando se hibrida en la membrana, la sonda se une a su secuencia objetivo complementaria a través de enlaces de hidrógeno y la sonda libre no unida se lava. Después de la inyección, la sonda específicamente unida se detecta mediante autorradiografía o reacción cromogénica.
Los métodos de hibridación clásicos incluyen principalmente: Southern blot, Northern blot e hibridación dot blot e hibridación in situ:
1. Hibridación por transferencia de ADN: existen dos métodos de transferencia de ácidos nucleicos:
Spot de solución de ADN o ARN directamente sobre una membrana de nitrocelulosa o membrana de nailon (transferencia de puntos o ranuras)
Transfiera el ADN o ARN fragmentado a la membrana mediante electroforesis en gel de agarosa (transferencia Southern y Northern). El ADN se restringe antes de la digestión con endonucleasa.
2. es un método específico para detectar ARN total o ARNm que se ha fijado en la tecnología de secuencia objetivo.
Hibridación de puntos
Coloca una pequeña cantidad de muestra de ácido nucleico. la membrana de filtro de nitrocelulosa y hornee a 80 ℃ para fijarla firmemente en la membrana. Luego use una sonda para la hibridación. La membrana de nailon, especialmente el fluoruro de polivinilideno (PVDF), tiene una mayor fuerza de unión al ADN, es resistente y fácil de operar. El muestreo se puede realizar manualmente o la muestra se puede detectar manualmente. La detección se puede realizar mediante autorradiografía con sonda radiactiva o revelado de color con sonda no radiactiva.
4. Hibridación in situ
La hibridación intracelular, el desarrollo o el desarrollo del color se realizan manteniendo la morfología celular. Se puede utilizar para análisis de ADN o ARN. La hibridación in situ por fluorescencia (FISH) para el análisis de ADN cromosómico se puede utilizar en muchos casos. áreas de investigación biológica así como estudios citogenéticos clínicos. Su principal ventaja es que puede usarse no sólo durante la metafase de la división celular, sino también entre divisiones.
Hibridación de ácidos nucleicos. un sentido amplio se refiere al proceso de renaturalización (enlaces de hidrógeno) entre moléculas de ácido nucleico no homólogas. Por lo tanto, se puede decir que la tecnología de pruebas genéticas actual, además del principio cualitativo de hibridación de ácidos nucleicos, está más o menos involucrado en el. popularización de la ley, como el proceso de renaturalización del cebador de la PCR, el proceso de detección de hibridación de chips genéticos, el proceso de renaturalización del cebador de la secuenciación de genes, varios métodos de detección de SNP, etc.