Servicios técnicos experimentales de detección de gen informador de luciferasa dual

1.? Introducción al experimento

El sistema del gen informador Luciferase es un experimento que utiliza la luciferina como sustrato para detectar la actividad de la luciferasa de luciérnaga (luciérnaga). El sustrato de luciferina emitirá luz (longitud de onda de 540 a 600 nm) bajo la acción de la luciferasa, y la intensidad de la luz puede reflejar el nivel de expresión de la luciferasa. El nivel de expresión de la proteína de la luciferasa está relacionado con la actividad del promotor, la estabilidad del ARNm y la eficiencia de la traducción. De esta manera, el promotor, la UTR y otras secuencias a probar se pueden fusionar y expresar con la caja ORF de luciferasa, y luego se puede detectar la intensidad de la luminiscencia para determinar el impacto de estas secuencias en la expresión de proteínas.

Para reducir los errores experimentales, la transfección se realiza al mismo tiempo. Se utiliza como referencia interna un plásmido que puede expresar de manera estable la luciferasa renal, catalizando la oxidación de la coelenterazina para producir luz azul (longitud de onda 460-540 nm); Ensayo del gen indicador de luciferasa dual.

2. Diagrama de flujo experimental

3. Contenido del servicio: los servicios de actividad del promotor de detección de reportero de luciferasa dual se dividen principalmente en los dos tipos siguientes:

a. ? Análisis de la actividad del promotor, utilizado para detectar si el promotor que se va a probar es activo y su región activa;

b. Verificación de la combinación del promotor y del factor de transcripción, que se utiliza para estudiar si un determinado factor de transcripción regula un determinado gen. Promotores a probar y sus regiones de unión

Contenido del servicio del proyecto, entrega de resultados, ciclo experimental, proporcionado por los clientes

Análisis de la actividad del promotor, síntesis y construcción del plásmido vector de luciferasa promotor de 2 kb. , Bacterias glicerol, resultados de secuenciación e informes experimentales 30 días hábiles 1. Células

2. Información genética

Construcción del plásmido vector promotor truncado de luciferasa, bacterias glicerol, resultados de secuenciación e informe experimental

Datos de prueba de cultivo celular y ensayo de luciferasa dual e informe experimental

Verificación, síntesis y construcción de la combinación de promotor y factor de transcripción del plásmido de vector de luciferasa promotor de tipo salvaje, 30 días hábiles para glicerol bacterias, resultados de secuenciación e informes experimentales [if !supportLists]1, ?[endif] células

[if !supportLists]2, ?[endif]información sobre genes y factores de transcripción

Constructo un plásmido vector de luciferasa promotor mutante, bacterias de glicerol, resultados de secuenciación e informe experimental

Construir un plásmido vectorial de expresión del factor de transcripción, bacterias de glicerol, resultados de secuenciación e informe experimental

Cultivo celular y dual -datos de ensayo de luciferasa e informes experimentales

4. Requisitos de entrega de muestras

vector recombinante:

El plásmido. no debe ser inferior a 2 ug, o aproximadamente 100 ul de bacterias de glicerol

b. Células:

Células vivas, 2 matraces T25, confluencia celular > 80 % (ciudad de Guangzhou o 2); tubos de células criopreservadas (fuera de Guangzhou)

Nota: Se pueden construir o comprar vectores o células en su nombre según lo programado

5. ¿Almacenamiento y almacenamiento de muestras? requisitos de transporte:

a. Los plásmidos o las bacterias de glicerol se pueden almacenar y transportar en bolsas de hielo;

b. Muestreo de células vivas

c. Células criopreservadas Muestreo/transporte con hielo seco: Debes avisarnos al menos un día antes del envío de la muestra