Explicación de los términos de la reacción de biuret
La reacción de biuret es exclusiva de péptidos y proteínas, pero es una reacción de color que los aminoácidos no tienen.
Generalmente, los compuestos que contienen dos grupos carbamoílo (es decir, enlaces peptídicos: -CO-NH-) en la molécula reaccionan con soluciones alcalinas para formar complejos de color púrpura o azul-violeta.
Dado que la molécula de proteína contiene muchos enlaces peptídicos similares a la estructura del biuret, también puede reaccionar con iones de cobre en una solución alcalina, y la relación entre la profundidad del color y el contenido de proteína cumple con la ley de Beer. dentro de un cierto rango y no tiene nada que ver con la composición de aminoácidos y el peso molecular de la proteína. Por lo tanto, se puede utilizar el método biuret para determinar el contenido de proteína (el error se puede reducir con la ayuda de un espectrofotómetro).
La reacción de biuret implica principalmente enlaces peptídicos y, por tanto, se ve menos afectada por la especificidad de las proteínas. Además, los reactivos son baratos y fáciles de utilizar, y el rango mensurable de proteína es de 1 a 10 mg. Es adecuado para la determinación del contenido de proteína que no requiere alta precisión. El contenido de proteína mensurable debe ser superior a aproximadamente 0,5 mg.
Las desventajas del método biuret son la baja precisión y el gran volumen de muestra requerido. Las sustancias que interfieren con este ensayo incluyen tampones que son aminoácidos o péptidos por naturaleza, como los tampones Tris, porque producen una reacción de color positiva y los iones de cobre también se reducen fácilmente, lo que a veces produce un precipitado rojo.
Notas:
El reactivo de biuret se prepara a partir de una solución de NaOH (0,1 g/ml) y una solución de CuSO4 (0,01 g/ml) y la proporción de preparación es de 5:1. Sin embargo, no es necesario preparar y utilizar el reactivo de biuret inmediatamente. Primero puede agregar NaOH a la solución de proteína para crear un ambiente alcalino y luego agregar CuSO4. Esto es diferente del reactivo de Fehling.