Pasos de preparación de anticuerpos monoclonales
Inmunizar animales es el proceso de inmunizar ratones con antígenos diana para generar linfocitos B sensibilizados. Los antígenos ingresan a los órganos inmunes periféricos a través de la circulación sanguínea o linfática, estimulando la clonación, activación, proliferación y diferenciación de los linfocitos B correspondientes en linfocitos B sensibilizados.
2. Fusión celular:
Matar al ratón con gas dióxido de carbono, extraer el bazo asépticamente, exprimirlo y triturarlo en una placa de cultivo para preparar una suspensión de esplenocitos. Las células de mieloma singénicas preparadas y los esplenocitos de ratón se mezclaron en una determinada proporción y se añadió el promotor de fusión polietilenglicol. Bajo la acción del polietilenglicol, varios linfocitos pueden fusionarse con células de mieloma para formar células de hibridoma.
3. Cultivo selectivo:
El propósito del cultivo selectivo es detectar células de hibridoma fusionadas y generalmente se utiliza el medio de cultivo selectivo HAT.
4. Cribado y clonación de clones positivos para hibridoma:
Sólo unas pocas células de hibridoma cultivadas en medio HAT secretan anticuerpos monoclonales con una especificidad predeterminada, por lo que es necesario su cribado y clonación. clonado. El método de dilución limitante se utiliza habitualmente para clonar células de hibridoma.
5. Preparación a gran escala de anticuerpos monoclonales:
Un gran número de anticuerpos monoclonales se preparan principalmente mediante inducción en animales y cultivo in vitro.
Datos ampliados:
Ventajas de los anticuerpos monoclonales:
1. Los hibridomas pueden sobrevivir "permanentemente" y pasarse in vitro. Mientras la línea celular no sufra mutaciones genéticas, puede seguir produciendo anticuerpos uniformes y muy específicos.
2. A partir de antígenos relativamente impuros se pueden obtener una gran cantidad de anticuerpos altamente específicos y homogéneos.
3. Debido a que se pueden obtener anticuerpos homogéneos "infinitos", es adecuado para métodos de análisis inmunológico caracterizados por anticuerpos marcados.
4. Debido a su alta especificidad y función biológica única, los anticuerpos monoclonales se pueden utilizar para radioinmunoensayos in vivo y terapias inmunodirigidas.
Enciclopedia Baidu-Anticuerpos monoclonales