Una breve historia del desarrollo de biorreactores de glándulas mamarias animales
La investigación sobre animales genéticamente modificados comenzó a principios de los años 80. En 1980, Gordon et al. introdujeron ADN recombinante en el pronúcleo de óvulos fertilizados de ratón mediante microinyección y obtuvieron por primera vez ratones que integraban genes extraños. En 1982, Palmiter et al. microinyectaron el gen de la hormona de crecimiento de rata en óvulos de ratón fertilizados y obtuvieron por primera vez "superratones" con un peso superior al doble que el de los ratones normales. También propusieron la idea de extraer proteínas farmacéuticas. de animales transgénicos. Muchos estudios en los años siguientes sentaron las bases para el sistema de tecnología animal transgénica, pero la verdadera investigación del biorreactor de glándula mamaria comenzó con el trabajo de Gordon et al en 1987. Combinaron el activador del plasminógeno tisular (tPA) con el promotor de leche materna de ratón. del gen WAP constituía un gen recombinante y se criaron con éxito 37 ratones transgénicos que podían expresar tPA en la leche. Ese mismo año nació en Roslin el primer ratón del mundo que podía secretar α1-antitripsina a partir de la leche (las ovejas genéticamente modificadas de AAT). Instituto en el Reino Unido. Desde entonces, se han iniciado investigaciones prácticas sobre biorreactores mamarios.
Simons et al. (Simons et al., 1987) inyectaron fragmentos de ADN recombinante como β-lactoglobulina-factor IX (BLG-FIX) y BLG-AAT con promotor MT en huevos de oveja fertilizados. obtuvieron descendencia transgénica con expresión de genes exógenos en la leche. Wilmut et al. inyectaron el fragmento del gen de la lactoglobulina de cabra con plásmidos de fusión F-IX y AAT-ADNc en óvulos fertilizados de ratón y oveja, y obtuvieron ratones y ovejas transgénicos que contenían F-IX y AAT en su leche. Wright et al. conectaron la región reguladora del gen BLG de oveja con el gen AAT humano y obtuvieron 4 ovejas transgénicas. Velander et al. utilizaron el promotor del gen WAP y el gen recombinante del ADNc de la proteína C humana (hPC) para obtener cerdos transgénicos. El nivel de expresión de hPC recombinante (1 g/l) es 200 veces mayor que la concentración de hPC en sangre humana. Ebert et al. utilizaron el promotor del gen β-CA para guiar la expresión de tPA en leche de cabra (1-3 g/l). Wilmut et al. (Wilmut et al., 1997) fueron pioneros en la tecnología de clonación de células somáticas y construyeron con éxito ovejas clonadas transgénicas que expresaban F-IX humano. En 2000, la empresa británica PPL integró el gen AAT humano en el locus de procolágeno de los fibroblastos fetales y utilizó las células transgénicas para producir ovejas transgénicas dirigidas (McCreath et al.; en 2001, utilizaron tecnología de selección genética para producir AAT); Ovejas clonadas con doble eliminación de 3-GT y priones. De los estudios anteriores se puede ver que la investigación sobre biorreactores de glándulas mamarias comenzó a partir del transgén del ratón animal modelo y gradualmente estableció una plataforma técnica para la preparación de biorreactores de glándulas mamarias de animales grandes.
El académico Shi Luji de mi país propuso el concepto de un biorreactor de glándula mamaria a principios de la década de 1980 y obtuvo conejos transgénicos que expresaban el antígeno de superficie del virus de la hepatitis B. En octubre de 1996, el Instituto de Genética de la Universidad de Fudan y el Instituto de Genética Médica de Shanghai cooperaron y obtuvieron con éxito ratones transgénicos y cinco ovejas transgénicas que expresaban la proteína F-IX activa, lo que realmente inició la construcción de reactores de glándula mamaria en mi país. En 1998, el Instituto de Genética Médica de Shanghai construyó un vector de expresión utilizando el promotor del gen de la caseína bovina para impulsar la expresión del gen F-IX, lo microinyectó en el pronúcleo masculino de huevos fertilizados de cabra y preparó con éxito cinco ovejas transgénicas. En febrero de 1999, el Instituto de Genética Médica de Shanghai obtuvo una vaca transgénica portadora del gen de la albúmina sérica humana. En 2000, la Universidad Agrícola de China y el Centro de Biotecnología Xingyuan de Beijing cooperaron para microinyectar el gen AAT humano modificado en el pronúcleo de óvulos fertilizados de cabra y obtuvieron tres cabras transgénicas portadoras de AAT humana. En 2005, Qingdao Senmiao Company cooperó con institutos de investigación científica como el Instituto de Genética y Biología del Desarrollo de la Academia de Ciencias de China y seleccionó cabras lecheras de Laoshan para completar tres tipos de antígeno de superficie de la hepatitis B humana, antitrombina AT-Ⅲ y beta humana. -interferón Se completó la construcción de vectores transgénicos y se completó el establecimiento de líneas celulares de fibroblastos fetales de oveja. La cabra lechera clonada se obtuvo con éxito utilizando tecnología de transferencia nuclear celular.
Los informes de éxito de los últimos años todavía se limitan a métodos convencionales como la microinyección, que todavía está muy por detrás de otros métodos.