Determinación de nitrógeno Kjeldahl
El método Kjeldahl es un método para determinar el nitrógeno total en un compuesto o mezcla. Es decir, en presencia de un catalizador, la muestra se digiere con ácido sulfúrico concentrado para convertir todo el nitrógeno orgánico en sales de amonio inorgánicas, y luego las sales de amonio se convierten en amoníaco en condiciones alcalinas, que se destilan con vapor de agua y se absorben. por exceso de ácido y luego titulando con una base estándar, se puede calcular la cantidad de nitrógeno en la muestra. Dado que el contenido de nitrógeno de las proteínas es relativamente constante, el contenido de proteínas se puede calcular a partir de su contenido de nitrógeno, por lo que este método es un método clásico de cuantificación de proteínas.
Principio
Las proteínas son compuestos orgánicos que contienen nitrógeno. Los alimentos se calientan y digieren con ácido sulfúrico y catalizadores para descomponer las proteínas, y el amoníaco descompuesto se combina con ácido sulfúrico para formar sulfato de amonio. Luego, la destilación alcalina libera el amoníaco, lo absorbe con ácido bórico y luego lo valora con una solución estándar de ácido sulfúrico o ácido clorhídrico. El contenido de proteína se obtiene multiplicando el factor de conversión en función del consumo de ácido. 1. Bajo la acción de calor fuerte, CuSO4 y H2SO4 concentrado, los radicales amina en la materia orgánica se nitran para generar (NH4)2SO4. Método de determinación de nitrógeno de Kjeldahl
La fórmula de reacción es: 2NH2 H2S04 2H=( NH4)2S04 (donde CuSO4 como catalizador) 2. Actúe con álcali en el determinante de nitrógeno Kjeldahl, libere NH3 mediante destilación y recójalo en una solución de H3BO3. La fórmula de reacción es: (NH4)2SO4 2NaOH＝2NH3 2H2O Na2SO4 2NH3 4H3BO3＝(NH4). )2B4O7 5H2O 3. Valorar con solución estándar de H2SO4 (o HCI) de concentración conocida, calcular el contenido de nitrógeno en función de la cantidad de HCI consumido y luego multiplicarlo por el factor de conversión correspondiente. La fórmula de reacción del contenido de proteína obtenida es: (NH4. )2B4O7 H2SO4 5H2O=( NH4)2SO4 4H3BO3 (NH4)2B4O7 2HCl 5H2O＝2NH4Cl 4H3BO3
Método de operación
1. Procesamiento de la muestra: Pese con precisión 0,2-2,0 g de muestra sólida o 2 -5 g de muestra semisólida O absorber 10-20 ml de muestra líquida (aproximadamente equivalente a 30-40 mg de nitrógeno), pasarla a una botella seca de nitrógeno de 100 ml o 500 ml, agregar 0,2 g de sulfato de cobre, 6 g de sulfato de potasio y 20 ml de ácido sulfúrico, agitar ligeramente y poner un embudo pequeño y colocar la botella en un ángulo de 45 grados sobre una malla de amianto con pequeños agujeros. Calentar a fuego lento hasta que el contenido esté completamente carbonizado y la espuma se haya detenido por completo. el líquido en la botella hierva ligeramente hasta que el líquido se vuelva azul verdoso. Después de que se vuelva claro y transparente, continúe calentando durante 0,5 horas. Retírelo y déjelo enfriar. Agregue con cuidado 20 ml de agua. Después de enfriar, transfiéralo a un matraz aforado de 100 ml y lave la botella de nitrógeno con una pequeña cantidad de agua. Coloque el líquido de lavado en el matraz aforado, agregue agua hasta la marca. , mezclar bien y reservar. Tome la misma cantidad de sulfato de cobre, sulfato de potasio y ácido sulfúrico concentrado que la muestra tratada y utilice el mismo método para realizar una prueba en blanco de reactivo. 2. Instale el dispositivo de fijación de nitrógeno como se muestra en la figura. Agregue unas gotas de indicador de rojo de metilo y unos mililitros de ácido sulfúrico a aproximadamente 2/3 del agua en el generador de vapor para mantener el agua ácida. Cuentas para evitar golpes. Controlado por un regulador de presión, el agua en la botella generadora de vapor de agua hirviendo se calienta. 3. Agregue 10 ml de solución de ácido bórico y 1 gota de indicador mixto en la botella receptora, inserte el extremo inferior del tubo del condensador debajo de la superficie del líquido, extraiga 10,0 ml de solución de digestión de muestra del vaso pequeño de vidrio a la cámara de reacción y lave. Dejar fluir el vaso de precipitados pequeño con 10 ml de agua en la cámara de reacción y tapar herméticamente el tapón de vidrio en forma de varilla del vaso pequeño. Vierta 10 ml de solución de hidróxido de sodio al 40% en un vaso pequeño, levante el tapón de vidrio y fluya lentamente hacia la cámara de reacción. Inmediatamente tape firmemente la tapa de vidrio y agregue agua al vaso pequeño para evitar fugas de aire. Sujete la abrazadera de tornillo y comience la destilación. Se introduce vapor en la cámara de reacción para que el amoníaco pase a través del tubo del condensador y entre en la botella receptora. Mueva la botella receptora para que el extremo inferior del tubo del condensador salga del plato de líquido, destile durante 1 minuto más y luego enjuague el exterior del extremo inferior del tubo del condensador con una pequeña cantidad de agua. Retire la botella receptora y ajuste la solución estándar de ácido sulfúrico 0,01 N o ácido clorhídrico 0,01 N a gris o azul violeta como punto final. Al mismo tiempo, extraiga 10,0 ml de solución de digestión del blanco de reactivo y presione 3.