Preguntas en Biología Molecular - Acerca del promotor lac :)

Promotor lac: El operón lactosa derivado de Escherichia coli es una secuencia de nucleótidos direccional en la molécula de ADN, que consta de un gen represor (LacI), un gen promotor (P), un gen operador (O) y una estructura genética que codifica tres enzimas relacionadas. a la utilización de la lactosa. El promotor Lac está regulado positivamente por el sistema catabólico y negativamente por el represor. La regulación positiva activa el promotor a través del factor CAP (proteína activadora del gen catabolito) y AMPc para promover la transcripción. La regulación negativa es la producción de la proteína represora LacZ por parte del gen regulador, que puede combinarse con el gen operador para impedir la transcripción. La lactosa y algunos análogos, como el IPTG, pueden formar un complejo con la proteína represora, cambiar su configuración y no pueden unirse al gen O, liberando así esta represión e induciendo la transcripción. Hablemos de algunos conocimientos relevantes:

Un promotor es una secuencia de la cadena de ADN que puede unirse a la ARN polimerasa e iniciar la síntesis de ARN. Es una secuencia reguladora indispensable e importante para la expresión genética. Sin un promotor, los genes no se pueden transcribir. Debido a que la ARN polimerasa bacteriana no puede reconocer los promotores de genes eucarióticos, los promotores utilizados en los vectores de expresión procarióticos deben ser promotores procarióticos.

El promotor de los procariotas consta de dos secuencias de nucleótidos separadas y muy conservadas, que son muy importantes para la síntesis de ARNm. Entre 5 y 10 BP aguas arriba del punto de inicio de la transcripción, hay una región rica en A y T que consta de 6 a 8 bases, llamada caja de Pribnow, también conocida como caja TATA o región -10. Las secuencias de bases de la caja de Pribnow de diferentes promotores varían ligeramente. Hay una región de 10 pb a 35 pb aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción, llamada región -35. La ARN polimerasa de E. coli reconoce y se une al promotor durante la transcripción. La región -35 se une a la subunidad S de la ARN polimerasa y la región -10 se une a la enzima central de la ARN polimerasa. Cerca del sitio de inicio de la transcripción, el ADN se desenrolla para formar una sola hebra y la ARN polimerasa forma un enlace fosfodiéster entre el primer y el segundo nucleótido, que luego la ARN polimerasa empuja hacia adelante para formar una nueva cadena.

Los promotores reguladores comúnmente utilizados en sistemas de expresión procarióticos incluyen Lac (promotor de lactosa), Trp (promotor de triptófano), Tac (promotor híbrido de lactosa y triptófano), lPL (promotor l L-zurdo de fago) , promotor del fago T7, etc.

Un promotor es una secuencia de la cadena de ADN que puede unirse a la ARN polimerasa e iniciar la síntesis de ARN. Es una secuencia reguladora indispensable e importante para la expresión genética. Sin un promotor, los genes no se pueden transcribir. Debido a que la ARN polimerasa bacteriana no puede reconocer los promotores de genes eucarióticos, los promotores utilizados en los vectores de expresión procarióticos deben ser promotores procarióticos.

El promotor de los procariotas consta de dos secuencias de nucleótidos separadas y altamente conservadas, que son muy importantes para la síntesis de ARNm. Entre 5 y 10 BP aguas arriba del punto de inicio de la transcripción, hay una región rica en A y T que consta de 6 a 8 bases, llamada caja de Pribnow, también conocida como caja TATA o región -10. Las secuencias de bases de la caja de Pribnow de diferentes promotores varían ligeramente. Hay una región de 10 pb a 35 pb aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción, llamada región -35. La ARN polimerasa de E. coli reconoce y se une al promotor durante la transcripción. La región -35 se une a la subunidad S de la ARN polimerasa y la región -10 se une a la enzima central de la ARN polimerasa. Cerca del sitio de inicio de la transcripción, el ADN se desenrolla para formar una sola hebra y la ARN polimerasa forma un enlace fosfodiéster entre el primer y el segundo nucleótido, que luego la ARN polimerasa empuja hacia adelante para formar una nueva cadena de ARN.

Los promotores reguladores comúnmente utilizados en sistemas de expresión procarióticos incluyen Lac (promotor de lactosa), Trp (promotor de triptófano), Tac (promotor híbrido de lactosa y triptófano), lPL (promotor l L-zurdo de fago) , promotor del fago T7, etc.

Secuencia de Shine Dalgarno

En 1974, Shine y Dalgarno descubrieron por primera vez que hay un sitio de unión al ribosoma en el ARNm, que es el codón de inicio AUG y una secuencia de 3 ~ 9 pb. ubicada 3 ~ 10 pb aguas arriba de AUG. Esta secuencia es rica en nucleótidos de purina y coincide con 16S rRNA 3? La secuencia terminal rica en pirimidina es complementaria y es el sitio de reconocimiento y unión del ARN ribosómico. Esta secuencia se denominará secuencia Shine-Dalgarno, o secuencia SD para abreviar. La distancia entre este y el codón de inicio AUG es uno de los factores importantes que afectan la transcripción y traducción del ARNm en proteína. La unión de algunas proteínas a secuencias SD también afecta la unión del ARNm a los ribosomas, afectando así la traducción de proteínas. Además, el segundo codón de los genes eucariotas debe seguir inmediatamente al ATG para producir una proteína completa.

Terminator

¿En un gen 3? ¿El fin del operador o 3? El final suele tener una secuencia de nucleótidos específica y tiene la función de terminar la transcripción. Esta secuencia se llama terminador de la transcripción o simplemente terminador. El proceso de terminación de la transcripción incluye: la ARN polimerasa se detiene en la plantilla de ADN, el alargamiento del ARN se detiene en la señal de terminación y el ARN transcrito se libera de la ARN polimerasa. Los terminadores de las ARN polimerasas de terminación fuerte tienen algunas similitudes estructurales, es decir, hay una región rica en A/T y una región rica en G/C, y la región rica en G/C tiene simetría palindrómica. El ARN formado después de la transcripción de este terminador tiene un bucle de tallo y una cadena de Us correspondiente a la región rica en A/T. El mecanismo de terminación de la transcripción es complejo y las conclusiones son inconsistentes. Sin embargo, cuando se construye un vector de expresión, para estabilizar el sistema del vector y evitar que la expresión de genes extraños clonados interfiera con la estabilidad del vector, generalmente se inserta un terminador de transcripción fuerte del ARN ribosomal rrB aguas abajo del sitio de clonación múltiple.