¿Métodos y principios para aislar y purificar proteínas enzimáticas?
Método de precipitación de la solución: la separación se basa en el principio de que las proteínas enzimáticas precipitan con ciertas sustancias en la solución en condiciones específicas. Por ejemplo, la proteína enzimática se puede precipitar añadiendo sal o disolvente orgánico y luego el precipitado se separa del sobrenadante mediante centrifugación.
Método de filtración por membrana: utilice diferentes tamaños de poro de membrana y límites de peso molecular para separar las proteínas enzimáticas de otros componentes. Por ejemplo, se pueden utilizar membranas microporosas para separar proteínas enzimáticas de sustancias macromoleculares (como restos celulares, agregados de proteínas, etc.). ).
Cromatografía: Utilizar la diferencia entre fase estacionaria y fase móvil para separar proteínas enzimáticas de otros componentes. Los métodos de cromatografía comúnmente utilizados incluyen cromatografía de filtración en gel, cromatografía de intercambio iónico, cromatografía de afinidad y cromatografía a contracorriente.
Electroforesis: Separación mediante diferencias de movilidad de proteínas enzimáticas en un campo eléctrico. Por ejemplo, las proteínas enzimáticas se pueden separar de otras proteínas mediante electroforesis en gel (como electroforesis en gel de poliacrilamida, electroforesis en gel de poliacrilamida, etc.). ).
Método de elución: utiliza la diferencia en la fuerza de interacción entre la proteína enzimática y el adsorbente para eluir la proteína enzimática del adsorbente. Por ejemplo, se puede utilizar la cromatografía de afinidad para separar enzimas de ligandos específicos (como iones metálicos, anticuerpos, etc.). ).
La elección de estos métodos generalmente depende de la naturaleza de la proteína enzimática, el grado deseado de purificación requerido y las condiciones experimentales. En la práctica, a menudo es necesario combinar varios métodos para lograr mayores efectos de purificación.