Pasos de cultivo para células pasadas
1. Célula adherente
(1) Aspirar el medio de cultivo antiguo.
(2) Lavar las células una o dos veces con D-PBS.
(3) Añadir solución de tripsina-EDTA (1ml/25cm2, 2ml/75cm2), incubar a 37°C durante varios minutos, observar al microscopio invertido cuando las células estén a punto de separarse y aparecer. forma de gránulos redondos, succione la solución de tripsina-EDTA. (Si no se elimina la tripsina-EDTA, después de la acción de la tripsina-EDTA, agregue una cantidad adecuada de medio de cultivo fresco que contenga suero para terminar la acción de la tripsina, luego centrifugue y luego aspire el sobrenadante.
( 4) Golpee suavemente Deje que las células se desprendan de la pared de la botella de cultivo. Agregue una cantidad adecuada de medio de cultivo nuevo. Utilice una pipeta para aspirar hacia arriba y hacia abajo varias veces para romper los grupos de células. Después de mezclar uniformemente, transfiera a un nuevo. botella de cultivo de acuerdo con la proporción de dilución y cultivo en condiciones de cultivo normales.
2. Células en suspensión
(1) Aspire el medio de cultivo celular, colóquelo en un tubo de centrífuga. centrifugar a 1000 rpm durante 5 minutos
(2) ) Aspirar el sobrenadante, agregar una cantidad adecuada de medio de cultivo fresco, mezclar uniformemente, transferir a una nueva botella de cultivo de acuerdo con la proporción de dilución y cultivar en condiciones normales. condiciones de cultivo.
3. Hibridoma
Algunas células de hibridoma necesitan cultivarse durante más de tres días para producir anticuerpos. Si se cambia el medio, los anticuerpos pueden perderse. No es necesario cambiar el medio después de la centrifugación para el subcultivo. Se agrega medio fresco directamente para diluir la concentración celular. Si el volumen es demasiado grande, se puede colocar inclinado o dividir en nuevos frascos de cultivo. >Información ampliada:
Método de pase:
1. Las células en crecimiento generalmente se pasan por centrifugación a 1000 rpm y el sobrenadante se elimina después de 20-30 segundos. Luego se mezclan y se pasan directamente, es decir, por suspensión. Cuando las células precipitan en la pared de la botella, se retira 1/2-1/3 del medio de cultivo sobrenadante y luego se utiliza una pipeta para canalizar directamente para formar una célula. suspensión para el paso.
2. Paso de células de crecimiento en semisuspensión (células Hela)
Algunas de estas células muestran un crecimiento adherente, pero la adhesión no es fuerte. se separa de la pared de la botella mediante pipeteo directo para el paso.
3. Las células que crecen en la pared se pasan mediante digestión enzimática. La solución de digestión comúnmente utilizada es 0,25 de tripsina. Enciclopedia - Cultura del Pasaje