¿Qué es una biblioteca de genes de ADNc? ¿Cuáles son las ventajas de utilizar una biblioteca de genes de ADNc para buscar genes objetivo?
Respuesta: La biblioteca de genes de ADNc se refiere al uso de ARNm como plantilla para formar su cadena única de ADN complementario (ADNc) bajo la acción de la transcriptasa inversa y luego formar ADN bicatenario. Este ADN bicatenario se liga con un vector adecuado (como un plásmido) para formar ADN recombinante. Introducido en células receptoras (como bacterias) y clonado, se convierte en una biblioteca de genes de ADNc. Dado que se utiliza ARNm total al construir una biblioteca de genes de ADNc, la biblioteca de genes tiene clones de ADN correspondientes a diversas moléculas de ARNm.
La biblioteca de genes de ADNc tiene muchas ventajas: (1) Su detección es relativamente sencilla y fácil. Esto se debe a que una biblioteca de genes de ADNc completa contiene muchos menos tipos de clones que una biblioteca de genoma completa, y la diferencia entre ambas es de 10 a 100 veces. Al mismo tiempo, las bibliotecas de genes de ADNc se derivan de ARNm, y el ARNm tiene períodos y ubicaciones de expresión específicos. La selección adecuada de la fuente de ARNm puede hacer posible lograr una alta proporción de clones de una secuencia específica en la biblioteca de genes de ADNc construida. . (2) Se pueden utilizar bibliotecas de genes de ADNc para clonar genes expresados en bacterias. Debido a que el clon de ADNc ha eliminado intrones, y al menos actualmente, se cree que los procariotas no tienen las moléculas enzimáticas para eliminar intrones del transcrito original. (3) Las bibliotecas de genes de ADNc se pueden utilizar para determinar la estructura de las secuencias de ADN de los genes. Dado que los clones de ADNc se derivan de ARNm maduro, la determinación de la secuencia del clon de ADNc puede analizar la secuencia de bases de los exones del gen. Al compararlo con la secuencia de ADN conocida del gen en el genoma, también se pueden determinar los límites entre intrones y exones.