¿Por qué deberíamos construir primero un vector de clonación y luego usar un vector de expresión?

La construcción de vectores de clonación consiste en una gran cantidad de fragmentos de ADN amplificados, que se utilizan para operaciones posteriores en el ADN, como la secuenciación, la digestión enzimática y la modificación. La construcción de vectores de expresión consiste en una gran cantidad de productos de traducción: proteínas.

¿Por qué deberíamos construir primero el vector de clonación y luego usar el vector de expresión? Supongo que es porque:

(1) La PCR se puede utilizar para obtener una gran cantidad de ADN, pero hay una tasa de error en la amplificación por PCR. Sin embargo, cada vez que se realiza una PCR convencional, hay que repetirla. -extrae ADN y ARN cada vez. Además, los kits de reacción de PCR no son baratos y utilizar la PCR para preparar grandes cantidades de ADN es algo rentable. Aunque la construcción de vectores de clonación también es más complicada (en comparación con la PCR), la tasa de éxito no es muy alta y se requiere detección, pero una vez que se recombina y transforma con éxito en E. coli, se puede rescatar. Cuando quieras usarlo, puedes preparar una gran cantidad de ADN agitando una bacteria.

②Requisitos de secuenciación. Si desea transferir expresión, primero debe determinar si el fragmento objetivo que amplifica es el que desea. No creas que puedes determinar la longitud de tu marcador diseñando una base específica. Esto es sólo especulación y no es científicamente riguroso. Por razones de seguridad o si la financiación lo permite, se deben secuenciar los fragmentos de genes amplificados. Normalmente, la secuencia enviada para la prueba es la secuencia construida en un vector, y el vector de clonación normalmente lleva cebadores de secuenciación. Ya confirmado esta es la secuencia que deseas. Para escribir un artículo, debes brindarle a la gente evidencia real.