¿Por qué la medición de nitrito requiere una longitud de onda de 538 nm?

En la medición de longitud de onda dual, el valor A (absorbancia) de la interferencia de fondo a 220 nm (longitud de onda de medición) es el doble del valor A (absorbancia) a 275 nm. El producto de reacción tiene una absorción máxima a 538 nm.

GB 5009.33-2010 Espectrofotometría

1. Principio

El nitrito se mide utilizando el método del clorhidrato de naftiletilendiamina.

Después de precipitar las proteínas y eliminar la grasa, la muestra se diazota con nitrito y ácido p-aminobenceno sulfónico en condiciones de ácido débil y luego se acopla con clorhidrato de naftiletilendiamina para formar un tinte rojo púrpura, que es un estándar externo. Método para medir el contenido de nitritos.

2. Reactivos y materiales

A menos que se especifique lo contrario, los reactivos utilizados en este método son de grado analítico. El agua es agua secundaria o agua desionizada especificada en GB/T 6682.

2.1 Ferrocianuro de potasio (K4Fe(CN)6·3H2O)

2.2 Acetato de zinc (Zn(CH3COO)2·2H2O)

2.3 Hielo Ácido acético ( CH3COOH)

2.4 Borato de sodio (Na2B4O7·10H2O)

2.5 Ácido para-aminobencenosulfónico (C6H7NO3S)

2.6 Clorhidrato de naftiletilendiamina (C12H14N2·2HCl)

2.7 Nitrito de sodio (NaNO2)

2.8 Nitrato de sodio (NaNO3)

2.9 Piel de zinc o varilla de zinc.

2.10 Sulfato de cadmio.

2.11 Solución de ferrocianuro potásico (106 g/L):

Pesar 106,0 g de ferrocianuro potásico (2.1), disolverlo en agua y diluir a 1000 mL.

2.12 Solución de acetato de zinc (220 g/L): Pesar 220,0 g de acetato de zinc (2.2), agregar primero 30 mL de ácido acético glacial (2.3) para disolver y diluir con agua hasta 1000 mL.

2.13 Solución saturada de bórax (50 g/L): Pesar 5,0 g de borato de sodio (2.4), disolver en 100 mL de agua caliente, enfriar y reservar.

2.14 Solución de ácido p-aminobencenosulfónico (4 g/L): Pesar 0,4g de ácido p-aminobencenosulfónico (2.5) y disolverlo en 100 mL 20 %

(V/ V) Ácido clorhídrico, mezclar bien en una botella marrón y guardar en la oscuridad.

2.15 Solución de clorhidrato de naftiletilendiamina (2 g/L): Pesar 0,2 g de clorhidrato de naftiletilendiamina (2.6), disolverlo en 100 mL de agua,

Después de mezclar, colocar en un recipiente de color marrón. Embotellar y conservar protegido de la luz.

2.16 Solución estándar de nitrito de sodio (200 μg/mL): Pesar con precisión 0,1000 g de nitrito de sodio de peso constante secado a 110 ℃ ~ 120 ℃, agregar agua para disolver, transferir a un matraz volumétrico de 500 ml, agregar agua diluir Hasta la marca, mezclar bien.

2.17 Solución estándar de nitrito de sodio (5,0 μg/mL): Antes de usar, tomar 5,00 mL de solución estándar de nitrito de sodio, colocarlos en un matraz aforado de 200 mL y agregar agua para diluir hasta la marca.

2.17 Solución estándar de nitrato de sodio (200 μg/mL, calculado como nitrito de sodio): Pese con precisión 0,1232 gy seque el nitrato de sodio de peso constante a 110 ℃ ~ 120

℃ Agregue agua. para disolver, transferir a un matraz aforado de 500 ml y diluir a volumen.

2.18 Solución estándar de nitrato de sodio (5 μg/mL): Antes de usar, tomar 2,50 mL de solución estándar de nitrato de sodio, colocarlos en un matraz aforado de 100 mL y agregar agua para diluir hasta la marca.

3. Instrumentos y equipos

3.1 Balanza: La sensibilidad es de 0,1 mg y 1 mg.

3.2 Triturador de tejidos.

3.3 Limpiador ultrasónico.

3.4 Estufa de secado a temperatura constante.

Espectrofotómetro 3,5.

4. Determinación

4.1 Pretratamiento de la muestra

Verduras y frutas frescas: Lavar la muestra con agua desionizada, secarla y picar las partes comestibles. y mezclar bien. Corte una cantidad adecuada de la muestra picada en cuartos y use un molinillo de alimentos para hacer un homogeneizado para su uso posterior.

Si necesita agregar agua, registre la cantidad de agua agregada.

4.2 Extracción

Pesar 5 g (con una precisión de 0,01 g) de la muestra homogeneizada (si se añade agua durante el proceso de preparación, se debe convertir según la cantidad de agua añadida) y colóquelo

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En un vaso de precipitados de 50 ml, agregue 12,5 ml de solución saturada de bórax, revuelva uniformemente, lave la muestra en un matraz volumétrico de 500 ml con aproximadamente 300 ml de agua a aproximadamente 70°C, calentar al baño maría hirviendo durante 15 min, sacar y colocar Enfriar al baño maría fría y llevar a temperatura ambiente.

4.3 Purificación del extracto

Mientras se agita el extracto anterior, añadir 5 mL de solución de ferrocianuro de potasio, agitar bien y luego añadir 5 mL de solución de acetato de zinc para precipitar la proteína. Agregar agua hasta la marca, agitar bien y dejar actuar 30 minutos para eliminar la grasa superior. Filtrar el sobrenadante con papel de filtro. Desechar 30 mL del filtrado inicial y conservar el filtrado para uso posterior.

4.4 Determinación de nitrito

Poner 40,0 mL del filtrado anterior en un tubo colorimétrico con tapón de 50 mL, y también pipetear 0,00 mL, 0,20 mL, 0,40 mL, 0,60 mL, 0,80 mL. , 1,00 ml, 1,50 ml, 2,00 ml, 2,50 ml de solución estándar de nitrito de sodio (equivalente a 0,0 μg, 1,0 μg, 2,0 μg, 3,0 μg, 4,0 μg, 5,0 μg, 7,5 μg, 10,0 μg, 12,5 μg de ácido nitroso de sodio), respectivamente colocados en tubos colorimétricos tapados de 50 mL. Agregue 2 ml de solución de ácido p-aminobencenosulfónico al tubo estándar y al tubo de muestra respectivamente, mezcle bien y déjelo reposar de 3 a 5 minutos. Luego agregue 1 ml de solución de clorhidrato de naftiletilendiamina a cada uno, agregue agua hasta la marca, mezcle bien. y dejar reposar 15 minutos, utilizar una cubeta de 2 cm, ajustar el punto cero con un tubo cero, medir la absorbancia a una longitud de onda de 538 nm y dibujar una curva estándar para comparar. Haga un blanco de reactivo al mismo tiempo.

5. Expresión de los resultados del análisis

5.1 Cálculo del contenido de nitrito

El contenido de nitrito (calculado como nitrito de sodio) se realiza según la fórmula (3) Calcular

Girar a la izquierda|Girar a la derecha

En la fórmula:

X1——El contenido de nitrito de sodio en la muestra, en miligramos por kilogramo (mg/kg

A1——La masa de nitrito de sodio en la solución de muestra para la determinación, la unidad es microgramos (μg);

m—La masa de la muestra, la unidad; es gramo (g);

V1——El volumen del líquido de muestra para medición, en mililitros (mL);

V0——El volumen total del líquido de tratamiento de muestra, en mililitros (mL)).

Expresado como la media aritmética de dos resultados de medición independientes obtenidos en condiciones de repetibilidad, y los resultados conservan dos cifras significativas.

6. Precisión

La diferencia absoluta entre dos resultados de medición independientes obtenidos en condiciones de repetibilidad no excederá el 10% de la media aritmética