¿Cómo se puede utilizar el acetonitrilo para fase reversa debido a su polaridad?
Como todos sabemos, la elección de la fase móvil en cromatografía líquida es muy importante y afecta directamente a los resultados de la separación cromatográfica. Sin embargo, cuando se trata de la selección de fases móviles de cromatografía de fase inversa, casi todo el mundo se centra en la selección de sales tampón, y se presta poca atención a la selección de fases orgánicas. El metanol y el acetonitrilo casi siempre se utilizan al azar. La razón principal es que no hay muchos tipos de fases orgánicas para elegir en la cromatografía líquida de fase reversa. La mayoría de ellas son metanol, acetonitrilo y una pequeña parte de tetrahidrofurano. De hecho, la elección de la fase orgánica también es muy importante, entonces, ¿cómo deberíamos elegir, metanol o acetonitrilo, u otra cosa?
A la hora de elegir una fase orgánica, la primera consideración es la fuerza y polaridad del disolvente. La fuerza del disolvente determina la cantidad de disolvente orgánico necesaria para eluir el compuesto, que disminuye a medida que aumenta la polaridad del disolvente en la cromatografía de fase reversa. Las concentraciones de disolventes de varios disolventes orgánicos que utilizamos habitualmente son: metanol 2,64, acetonitrilo 3,12 y tetrahidrofurano 4,4. Desde una perspectiva numérica, las capacidades de elución de varios disolventes orgánicos son metanol lt; acetonitrilo lt; figura a continuación:
Si un determinado compuesto puede eluir en condiciones de 20 % de agua con acetonitrilo, si el acetonitrilo se reemplaza con metanol, se necesitará aproximadamente un 28 % de agua con metanol para eluir, y si se reemplaza con tetrahidrofurano, sólo el 15% de tetrahidrofurano puede eluirlo.
Consejos: lo anterior son solo datos teóricos. En experimentos reales, si necesita lograr una retención similar, reemplace el acetonitrilo con metanol. Recomendamos agregar 10 metanol adicionales según la figura anterior. tetrahidrofurano, es necesario reducir 5 tetrahidrofurano.
De la estructura de los tres disolventes, el metanol es a la vez un fuerte donador de protones y un fuerte aceptor de protones bajo la interacción de enlaces de hidrógeno; el acetonitrilo tiene un efecto dipolar y también es un fuerte aceptor de protones bajo la interacción de enlaces de hidrógeno Un aceptor de protones muy débil; el tetrahidrofurano solo puede aceptar protones bajo enlaces de hidrógeno, pero no puede donar protones.
Columna cromatográfica: Columna de fenilo Drogon 150*4,6 mm 5 um Fase móvil: dihidrogenofosfato de potasio 20 mM (pH 2,5): fase orgánica (imagen) Caudal: 1,0 ml/min Longitud de onda de detección: UV@220 nm Compuestos: 1. Sacarina sódica 2. Ácido parahidroxibenzoico 3. Ácido sórbico 4. Ácido deshidroacético 5. Parahidroxibenzoato de metilo
Como se muestra en los resultados experimentales anteriores, se utilizaron acetonitrilo y metanol como Cuando se eluye el disolvente, el orden de los picos cambian. Desde el punto de vista estructural, la sacarina sódica es un fuerte aceptor de protones y el ácido benzoico es un fuerte donante de protones. Cuando se utiliza metanol como fase móvil, el metanol es a la vez un fuerte aceptor de protones y un fuerte donante de protones, sus efectos se cancelan. Su elución depende exclusivamente de la capacidad de elución del propio metanol; mientras que el acetonitrilo es sólo un aceptor débil de protones y no puede donar protones. En comparación, existe una capa adicional de enlaces de hidrógeno entre el acetonitrilo y el ácido benzoico. eluye más rápido en acetonitrilo, lo que produce un cambio en el orden de los picos. El ácido deshidroacético y el parahidroxibenzoato de metilo son dos sustancias. En comparación, el parahidroxibenzoato de metilo tiene un anillo de benceno y los electrones π en el acetonitrilo interfieren con su unión a la fase estacionaria del fenilo, por lo que los picos son más rápidos y el orden de los picos también ha cambiado. .
Consejos: cuando utilice una columna de fenilo, utilice metanol como fase orgánica para reflejar mejor la selectividad π-π del grupo fenilo. Al mismo tiempo, también se puede seleccionar un disolvente adecuado como fase móvil en función de la capacidad del compuesto objetivo para aceptar o donar protones, lo que puede lograr efectos de separación inesperados.
Además, la viscosidad del disolvente y la longitud de onda de corte de absorción UV también son cosas que debemos considerar al elegir la fase orgánica.