¿Por qué el medio HAT puede seleccionar células de hibridoma?
¿Por qué el medio de cultivo HAT puede seleccionar células de hibridoma?
Las células de hibridoma seleccionadas en HAT son células mixtas que producen una variedad de anticuerpos. El cribado se basa en la capacidad de las células de hibridoma para ambos. Se lleva a cabo por la naturaleza del paso ilimitado y la capacidad de crecer en medio HAT.
Antes del monocultivo en placas de múltiples pocillos, las células deben diluirse de forma limitada para que solo haya una célula en algunos pocillos. , y esta célula El clon cultivado se convierte en monoclonal, lo que garantiza la pureza del anticuerpo y secreta un solo tipo de anticuerpo.
El medio selectivo HAT se basa en nucleótidos de hipoxantina y nucleósidos de pirimidina para el diseño de vías biosintéticas ácidas. .
Después de inducir artificialmente la fusión de esplenocitos de ratón y células de mieloma mediante tecnología de anticuerpos monoclonales, las células aparecerán en diversas formas, como esplenocitos-células tumorales, esplenocitos-esplenocitos y células tumorales-células tumorales. Los polímeros celulares, las células del bazo no fusionadas y las células tumorales, entre las cuales sólo son útiles las fusiones de células del bazo y células tumorales, las células del bazo normales sobreviven sólo de 5 a 7 días en el medio de cultivo y no requieren un examen especial. y la cuestión clave es eliminar las células tumorales no fusionadas. El medio de selección tiene tres componentes clave: hipoxantina, metotrexato y timidina, de ahí el nombre de medio HAT. Este medio logra el propósito de eliminar las células tumorales no fusionadas al inhibir la síntesis de nucleótidos del tumor. Las células tienen dos vías básicas para sintetizar nucleótidos de purina, una es a partir de ribosa fosfato, aminoácidos y CO2. Comenzando con compuestos como el NH3, el ácido fólico es una coenzima importante y el metotrexato es un antagonista del ácido fólico, que puede bloquear las células tumorales. La fosforribosiltransferasa cataliza específicamente la síntesis de nucleótidos. Por ejemplo, la hipoxantina se convierte en nucleótidos de purina mediante la hipoxantina fosforribosiltransferasa (HGPRT). líneas celulares deficientes, por lo que no pueden crecer en medio HAT y no sintetizan ni secretan inmunoglobulinas. Solo las células fusionadas tienen las propiedades genéticas de ambos padres y pueden sobrevivir y reproducirse en medio HAT durante mucho tiempo y secretar anticuerpos. Las células se diluyeron en cultivos individuales y los clones de hibridoma que secretaban anticuerpos específicos en gran medida se identificaron y seleccionaron mediante ELISA.