¿Por qué la Farmacopea China utiliza el método PCR específico para Agkistrodon vulgaris, mientras que el método PCR-RFLP se utiliza para Fritillaria fritillary?

Las características respectivas de Agkistrodon y Fritillaria determinan el método utilizado para identificarlos.

La PCR utiliza el ADN para desnaturalizarlo en una sola cadena a una temperatura alta de 95 °C in vitro. A baja temperatura (generalmente alrededor de 60 °C), los cebadores se combinan con la cadena simple según el principio. del apareamiento de bases complementarias, y luego se ajusta. Cuando la temperatura alcanza la temperatura de reacción óptima de la ADN polimerasa (alrededor de 72 °C), la ADN polimerasa sintetiza hebras complementarias en la dirección del fosfato al azúcar de cinco carbonos (5'-3'). Una máquina de PCR basada en polimerasa es en realidad un dispositivo de control de temperatura que puede controlar bien la temperatura de desnaturalización, la temperatura de renaturalización y la temperatura de extensión.

El principio básico de PCR-RFLP es utilizar PCR para amplificar el ADN objetivo y luego utilizar endonucleasas específicas para digerir y cortar los productos amplificados en fragmentos de diferentes tamaños, que se resuelven directamente en electroforesis en gel. Diferentes alelos tienen diferentes distribuciones de sitios de enzimas de restricción, lo que produce bandas de fragmentos de ADN de diferentes longitudes. Esta tecnología mejora enormemente el contenido y la especificidad relativa del ADN objetivo, además el método es simple y el tiempo de tipificación es corto.