Cromatografía líquida de interacción hidrofílica y su aplicación en proteómica

El proteoma es el producto directo del genoma. Debido al empalme de genes y a las modificaciones postraduccionales, el número de proteínas en un proteoma puede exceder el número proporcionado por los genes, y la mayoría de las proteínas funcionales en el proteoma se expresan en baja abundancia, lo que hace poco práctico analizar directamente los lisados ​​con espectrometría de masas. EM). . Antes de esto, es necesario aislar y purificar lisados ​​celulares complejos. En la actualidad, la cromatografía líquida de interacción hidrófila (hilic) se utiliza ampliamente en la investigación y preparación de proteínas. Es una nueva y poderosa herramienta para la separación, purificación y análisis de macromoléculas biológicas, especialmente proteínas. 1 principios básicos. Tecnología HILIC 1.1 La característica de la tecnología HILIC es el uso de una fase estacionaria hidrófila y una fase móvil hidrófoba, y la separación se logra principalmente a través de la interacción hidrófila entre la fase estacionaria y el soluto. La fase estacionaria hidrófila puede enriquecer las moléculas de agua en el tampón, formando así una capa de agua en la superficie de la fase estacionaria, y el soluto hidrófilo se distribuye entre la capa de agua y el eluyente hidrófobo. En HILIC [1], la fase móvil es un disolvente orgánico que contiene una pequeña cantidad de producto acuoso/disolvente polar, el componente orgánico es el eluyente débil y la fase acuosa es el eluyente fuerte. La separación final es a través de la interacción electrostática entre el eluyente y la fase estacionaria para competir por los sitios de unión del soluto hidrofílico y la fase estacionaria o para formar enlaces de hidrógeno con la fase estacionaria, de modo que el soluto se eluya aumentando la afinidad. de la fase móvil Acuoso para completar la elución............

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Cromatografía de interacción hidrofílica:/113614/