"Biología molecular moderna" -Edición Zhu Yuxian-Notas de lectura

Desde que me especialicé en informática, mi dirección de investigación actual y futura es principalmente la bioinformática. Por lo tanto, es necesario estudiar la biología molecular con atención, porque muchos principios experimentales biológicos y conceptos biológicos (transposones, potenciadores, elementos reguladores cis, etc.) son fáciles de entender si no ha estado expuesto a ellos al leer el artículo. la cabeza es grande. Por lo tanto, este artículo está dirigido principalmente a principiantes que se especializan en informática y estudian información biológica y otros campos.

Sin más, el libro de texto que leí es la 4ª edición de Zhu Yuxian, porque comencé a grabar desde la mitad de la lectura. Los puntos clave de algunos capítulos no grabados se completarán más adelante.

Los capítulos 5 y 6 hablan principalmente sobre técnicas experimentales de uso común, que son muy útiles para comprender por qué se realizan ciertos experimentos en artículos relacionados con la biología y qué tipo de datos experimentales usar cuando se buscan datos relevantes. Útil.

El ADN recombinante suele formarse integrando fragmentos de ADN específicos en vectores como virus o plásmidos para formar ADN recombinante, que luego se introduce en las células huésped mediante infección o inyección. Permitir que las células huésped expresen cierto ADN, generalmente para los siguientes fines: sintetizar proteínas, estudiar las funciones de cierto ADN, etc.

Las materias primas necesarias para el ADN recombinante son:

Algunos vectores tienen múltiples sitios de clonación: es decir, contienen múltiples sitios de enzimas de restricción, que son los sitios de inserción de múltiples genes extraños. Se pueden lograr diferentes recombinaciones de ADN a través de múltiples sitios de clonación, así como se pueden obtener múltiples resistencias al mismo tiempo.

Cribado de manchas azul-blancas: Las colonias cuyo ADN ha sido recombinado y expresado en el huésped son blancas, mientras que las colonias no transformadas son azules.

Transformación bacteriana: una vez recombinados las moléculas de ADN exógeno y los vectores, es necesario enviarlos al huésped. Normalmente, las bacterias como Escherichia coli tienen poca capacidad para absorber el ADN recombinado, por lo que se necesita cloruro de calcio. Sólo mediante el procesamiento estos ADN recombinantes pueden absorberse y expresarse mejor en las células huésped.

La investigación de Cohen, Boyer y otros descubrió que los genes de ciertos organismos superiores, como Xenopus laevis, también pueden trasladarse a células procarióticas (como Escherichia coli) mediante tecnología de ADN recombinante y pueden expresarse con éxito. .

Dado que los polinucleótidos de la cadena de ADN se encuentran en estado aniónico, se moverán hacia el electrodo positivo cuando se coloquen en un campo eléctrico. La distancia de movimiento está relacionada con el número de nucleótidos que componen el ADN. (Debido a que cada banda de nucleótidos tiene la misma carga eléctrica, debido a la diferencia en la carga y el tamaño molecular, la velocidad de migración y la distancia en la electroforesis también son diferentes, por lo que se pueden separar fragmentos de ADN.

Normalmente la capacidad del gel para resolver fragmentos de ADN está relacionada con la concentración. Para el mismo tipo de gel, cuanto mayor es la concentración, menor es el espacio de corte, mayor es la capacidad de distribución de las moléculas de ADN y menor es el tamaño de los fragmentos de ADN que se pueden separar. Por el contrario, cuanto mayor es la concentración, sólo se pueden separar fragmentos más largos.

Para fragmentos de ADN muy grandes (gt; 50 kb), la electroforesis en gel de agarosa ordinaria es difícil de separar, por lo que se inventó la electroforesis en gel de campo eléctrico pulsado.

La PCR es un método común para la amplificación rápida in vitro de genes o secuencias de ADN por determinar. Los pasos específicos son los siguientes:

Un instrumento de PCR basado en polimerasa es en realidad una temperatura. -Dispositivo controlado que puede desnaturalizar. La temperatura, la temperatura de renaturalización y la temperatura de extensión están bien controladas.

Cinco elementos de la reacción de PCR: cebador (el cebador de PCR es un fragmento de ADN, y el cebador para la replicación del ADN intracelular es una cadena de ARN), enzima, dNTP (trifosfato de desoxirribonucleósido), ADN molde y tampón (que requiere Mg2).