Explicación de los términos de la biblioteca cdna
Biblioteca de ADNc: se refiere a una colección de clones formados conectando todos los fragmentos de ADNc formados por transcripción inversa del ARNm transcrito en un determinado período de desarrollo de un organismo y un determinado vector.
Explicación de los términos de la biblioteca de genes:
La biblioteca de genes se refiere a cortar diferentes genes de un determinado organismo en fragmentos y luego conectar aleatoriamente estos fragmentos a ciertos plásmidos u otros vectores. Luego se transfieren a las células huésped apropiadas, y las líneas de propagación clonal de cada fragmento se forman mediante proliferación celular.
Cuando estos clones son lo suficientemente numerosos como para incluir todos los genes de un determinado organismo, el número total de clones se denomina biblioteca genética de ese organismo.
Clasificación de las bibliotecas de genes:
Las bibliotecas de genes se pueden dividir en bibliotecas de genomas y bibliotecas de genes parciales. Las bibliotecas de genomas contienen todos los genes de un determinado organismo, mientras que las bibliotecas de genes parciales sólo contienen una parte de los genes de un determinado organismo. Por ejemplo, una biblioteca de ADNc es una biblioteca de genes parcial que se construye durante el proceso de corte y empalme del ARNm. Se han eliminado los intrones y otros componentes, lo que la hace más conveniente para la recombinación del ADN.
Pasos para construir una biblioteca de genes:
1. Extracción de ADN genómico:
Extraer ADN genómico de muestras biológicas que se van a analizar es el primer paso para construir una biblioteca de genes. paso de la biblioteca de genes. Existen muchos métodos para extraer ADN, incluidos kits comerciales y métodos de extracción manual. Elija un método de extracción adecuado según el tipo de muestra y los requisitos experimentales.
2. Fragmentación del ADN genómico:
Para fragmentar aleatoriamente el ADN genómico en fragmentos de ADN de diferentes tamaños se puede utilizar digestión enzimática o ultrasonido. Dicer es una enzima que reconoce secuencias específicas y corta el ADN, mientras que el ultrasonido rompe el ADN por medios físicos.
3. Reparación de extremos romos:
Dado que los fragmentos de ADN obtenidos después del corte enzimático o ultrasónico pueden tener extremos desiguales en ambos extremos, se requiere reparación de extremos romos. La reparación de extremos romos utiliza enzimas y productos químicos específicos para cortar los salientes en ambos extremos de un fragmento de ADN, haciéndolo complementario.
4. Conector:
El conector es un fragmento corto de ADN que se conecta a ambos extremos del fragmento de ADN para proporcionar la estructura necesaria para la posterior construcción de la biblioteca. El diseño del conector debe considerar el grado de coincidencia con los cebadores de secuenciación de la biblioteca para garantizar que las reacciones de secuenciación posteriores puedan desarrollarse sin problemas.