Principio de extracción de ARN

El ARN generalmente se extrae mediante el método Trizol:

Trizol es un reactivo de extracción de ARN total que contiene isotiocianato de guanidinio y otras sustancias, que pueden lisar rápidamente las células e inhibir la actividad de la nucleasa liberada. . Actualmente, el método Trizol se utiliza habitualmente para extraer ARN de tejidos o células.

Principio de acción de Trizol:

En muestras homogeneizadas o disueltas, el reactivo Trizol puede mantener la integridad del ARN mientras destruye células y lisa componentes celulares. Después de añadir cloroformo y centrifugar, el lisado se separó en una fase acuosa y una fase orgánica. El ARN existe en la fase acuosa.

Tras la transferencia de fase acuosa, el ARN se recupera mediante precipitación con isopropanol. Después de eliminar la fase acuosa, el ADN se puede precipitar de la fase intermedia con etanol y las proteínas se pueden precipitar de la fase orgánica añadiendo alcohol isopropílico.

Información ampliada:

La finalidad de la extracción del ARN

El ARN se utiliza en diferentes experimentos posteriores, y sus requisitos de calidad son diferentes.

La construcción de la biblioteca CDNA requiere la integridad del ARN sin residuos de inhibidores de reacciones enzimáticas.

Northern tiene requisitos más altos para la integridad del ARN y menores requisitos de residuos de inhibidores de reacciones enzimáticas;

RT- La PCR no tiene requisitos elevados para la integridad del ARN, pero tiene requisitos estrictos para los residuos inhibidores de la reacción enzimática. Por lo tanto, aclarar el propósito del experimento es la primera condición para realizar experimentos posteriores.

Fuente de referencia: Enciclopedia Baidu-RNA