Traducción ibv

El gen M es uno de los genes inmunogénicos importantes del virus de la bronquitis infecciosa. El gen M puede tener determinantes antigénicos importantes y está altamente conservado durante la evolución. En este estudio, se seleccionó el gen M del IBV sobre la base del estudio del gen de la proteína estructural del IBV, la amplificación por PCR se amplió para introducir el sitio de corte de la enzima BamH. Después del corte de la enzima, se insertó en la vacuna de ADN "suicida". vector pSCA1 CMV bajo el sitio de clonación IE para construir la partícula pSCA1-M del material de expresión de la vacuna de ADN "suicida" y se extendieron volúmenes iguales de partículas de material recombinante pSCA1-M, pcDNAM de la vacuna de ADN del gen M de IBV convencional y el vector espacial pSCA1 para teñir. Células vero. Después de 48 horas, mediante un experimento de inmunofluorescencia indirecta, encontramos que el citoplasma de los grupos de tinción extendida PSCA 1-m y PCD Nam aumentó significativamente. La fluorescencia verde brillante específica de Sly y la falta de fluorescencia del grupo portador espacial pSCA1 es negativa. Esto confirma que los portadores de vacunas de ADN "suicidas" pueden expresar con éxito el gen M. Sin embargo, el número de células luminiscentes en el grupo pSCA1-M fue menor que en el grupo pcDNAM, lo que indica que la tasa de tinción extendida de la vacuna de ADN "suicida" fue menor que la de las vacunas de ADN convencionales.

Para evaluar el efecto inmunológico de la vacuna de ADN "suicida" del IBV, utilizamos la vacuna de ADN "suicida" construida pSCA1-M, el vacío de ADN involuntario PCD Nam, el vector espacial pSCA1 y el aislamiento al vacío inactivado del IBV. Se inmunizaron pollitos inmunes no sanos y a un grupo de control se le inyectó un volumen igual de solución de PBS. Porque la separación del suero de los pollos del grupo semanal se mantuvo durante 5 semanas después de la inmunización. Se utilizaron pruebas FACS y ELISA indirecta para ajustar los cambios dinámicos de los subconjuntos de linfocitos T de sangre periférica CD3, CD4, CD8 y la IgG sérica específica anti-IBV, respectivamente. Después de la quinta semana, se llevó a cabo un fuerte experimento de protección con cepas de IBV. Los resultados de las pruebas experimentales ELISA indirectas muestran que la vacuna de ADN "suicida" que construimos puede estimular al cuerpo a producir anticuerpos séricos específicos contra el IBV. Después de que la inmunidad aumenta y alcanza un pico en la tercera semana, comienza a disminuir. Su nivel de anticuerpos es equivalente al de las vacunas convencionales de IBV y de ADN, pero más bajo que el de las vacunas inactivadas. Los resultados de los cambios dinámicos en las subpoblaciones de linfocitos T mostraron que el grupo "suicida" de la vacuna de ADN PSCA 1-m y el número de linfocitos T CD3, CD4 y CD8 eran mayores. La diferencia es significativa (P