[Una breve discusión sobre el diagnóstico de campo y la tecnología de identificación de patógenos en interiores de la pudrición total del trigo] Método de diagnóstico rápido de bacterias patógenas

[Resumen] La pudrición total del trigo es una enfermedad devastadora en la producción de trigo. Este artículo utiliza métodos de diagnóstico de campo e identificación de patógenos para confirmar el diagnóstico de la pudrición total del trigo y, finalmente, utiliza la ley de Koch para verificar el diagnóstico completo. Enfermedad de corrosión. [Palabras clave] Trigo; pudrición total; diagnóstico de campo; identificación de patógenos

La pudrición total del trigo es una de las enfermedades importantes del trigo. En la actualidad, ha ocurrido en muchos países productores de trigo del mundo. En mi país, se descubrió en Hebei y otras provincias ya en la década de 1950. En los últimos años, se ha producido sucesivamente en la zona norte de trigo de invierno, en la zona noroeste de trigo de primavera y en la zona baja de trigo del río Yangtze, y tiene una tendencia a disminuir. expansión y agravamiento. Después de que el trigo se infecta, se reduce el número de macollos, la tasa de panículas es baja y se reduce el peso del grano. Generalmente, el rendimiento de los campos de trigo afectados por la enfermedad se reducirá entre un 10% y un 20% y, en casos graves, el rendimiento se reducirá en más del 50%. Representa una gran amenaza para la producción de trigo. Ha sido catalogado como objeto de cuarentena de plantas domésticas. La identificación correcta de la pudrición total del trigo es la base para comprender la distribución de la enfermedad y tomar medidas de control oportunas.

1. Diagnóstico de campo

La pudrición total del trigo también se conoce como tizón del trigo y pata negra. Es una enfermedad de las raíces que solo infecta las raíces y 1 o 2 nudos en la base del tallo. Las partes aéreas de las plantas enfermas se vuelven pequeñas, amarillas y, en casos graves, mueren, provocando orejas blancas. (1) Etapa de plántula. Una vez infectadas las plántulas, las plantas serán cortas y pequeñas, con muchas hojas amarillas en las partes inferiores. Las raíces de las semillas y los tallos primarios se volverán grises y negros. En casos severos, las plántulas de trigo morirán sucesivamente. (2) Etapa de macollamiento. Las plántulas de trigo de invierno enfermas se vuelven verdes lentamente, tienen pocos macollos, la mayoría de las raíces de las plantas enfermas se vuelven negras y aparece una capa más obvia de micelio gris negruzco en la base del tallo y en el interior de la vaina de la hoja. (3) Periodo de descabezado y llenado de grano. Después del espigado, las plantas enfermas en el campo aparecen en racimos o parches con espigas blancas prematuras, y las raíces enfermas se vuelven negras y son fáciles de arrancar. La superficie de la base del tallo y el lado interno de las vainas de las hojas están cubiertos con una capa de hifas de color marrón oscuro estrechamente entrelazadas, que parecen "pies negros". El color luego se profundiza hasta adquirir una forma de yeso negro y está densamente cubierto de marrón oscuro. astecia granular. La diferencia entre esta enfermedad y otras enfermedades de la raíz del trigo es que las raíces de las semillas y las raíces secundarias se vuelven negras y se pudren, y en la base del tallo crece un micelio negro parecido al yeso.

2. Patógenos

Gaeumannomyces graminis (Sacc.) Art et Oliver tritici (Sacc.) Walker se denomina variedad de trigo de cáscara-corazón y pertenece a los hongos Ascomycotina. Los ascotecios de las variedades de trigo están agrupados o dispersos en los haces de hifas dentro de las vainas de las hojas en la base de los tallos de las plantas envejecidas y enfermas. Tienen forma de matraz y son negros, rodeados de hongos de hifas marrones. Los cuellos a menudo están doblados hacia un lado. y tiene un orificio con filamentos limítrofes Expuesto en la epidermis, el asca suele estar desconectado del pedestal. Los ascos están igualmente dispuestos en la cavidad del asco. En la etapa inicial, hay filamentos pseudolaterales entre los ascos, que desaparecen en la etapa posterior. Tienen forma de maza y son incoloros. Las ascosporas están dispuestas en haces o dispersas, filamentosas, incoloras, ligeramente curvadas, con 3-7 falsos septos. El micelio maduro es de color marrón castaño, con septos escasos y ramas en ángulos agudos. Hay un tabique en la unión de la rama principal y la rama lateral, formando una "V" invertida.

3. Identificación de bacterias patógenas

La identificación de la pudrición total del trigo no puede confirmarse únicamente mediante el diagnóstico de los síntomas en el campo. A continuación se presenta una introducción al método de identificación de patógenos en interiores:

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1.Método de aislamiento del patógeno de la pudrición total

Utilizando el método de cultivo de tejidos en interiores, también se puede determinar la vida y muerte del patógeno de la pudrición total del trigo y el tiempo de supervivencia en el tejido enfermo. Se utilizará como un tipo de agente de detección para prevenir y controlar el método del patógeno de la pudrición total del trigo. Pseudomonas aeruginosa puede crecer normalmente en medio PDA (patata, agar, glucosa). Durante la separación, agregue una o dos gotas de ácido láctico al 25% o 200 unidades de estreptomicina a cada placa para inhibir el crecimiento de bacterias diversas. La superficie del tejido se desinfectó. Los materiales nuevos se trataron con 0,1 nitrato de plata (AgNO3) durante 5 minutos, los materiales viejos se trataron con 1 nitrato de plata durante 5 minutos y luego se enjuagaron tres veces con agua esterilizada y se transfirieron a la placa. Lo mejor es separar los materiales utilizados para eliminar los tallos enfermos de las vainas de las hojas (cortadas en segmentos de 3 mm) y de las nuevas raíces enfermas.

2. Cultivo de bacterias de erosión total

Colocar la placa separada en una incubadora ligera, cultivarla a 25°C y 14 horas de luz todos los días. El micelio crecerá después de 3-. 4 días, y luego saque el micelio a lo largo del borde y colóquelo en una nueva placa PDA para continuar cultivando y obtener una colonia de erosión total en aproximadamente 7 días. En el medio PDA, las colonias eran de color negro grisáceo, con haces de hifas evidentes, y las hifas en los bordes de las colonias estaban enrolladas hacia el centro.

4. Regla de Koch para verificar el hongo de corrosión total

1. Preparación de medios de cultivo de harina de maíz y arena para ampliar el cultivo de hongos de corrosión total.

Poner la harina de maíz, arena y agua según la proporción de 1:1,5:l (capacidad), mezcle la harina de maíz, la arena y el agua uniformemente según la proporción de 1:1,5:1, póngalo en un matraz Erlenmeyer (uno -tercio de la capacidad de cada frasco), y esterilícelo durante 2 horas. Para inocular las bacterias, mueva las bacterias patógenas cultivadas en inclinación o en placa a un matraz Erlenmeyer en condiciones estériles y colóquelas en una incubadora a 25°C durante 30. días. , cuando el micelio esté lleno, agítelo una vez en paralelo para que el micelio crezca uniformemente.

2. Preparación de tierra esterilizada

Colocar una cierta cantidad de tierra en una bandeja, el espesor de la tierra debe ser uniforme y colocarla en una caja de esterilización por calor seco para que se seque. esterilización por calor Esterilizar continuamente a 160°C durante 4 horas, luego dejar enfriar antes de usar.

3. Se utilizan dos métodos de inoculación para la inoculación.

(1) Método de inoculación de la torta de champiñones: seleccione semillas de tamaño uniforme, desinféctelas con alcohol al 70% durante 7 minutos, lávelas bien. con agua esterilizada y luego germinar. Coloque la tierra esterilizada en una maceta de plástico y aplane la superficie de la placa PDA cultivada durante 10 días, saque tortas de hongos de 1 cm de diámetro a lo largo del borde del crecimiento del micelio y colóquelas en la maceta con la superficie del hongo hacia arriba, 5 piezas por olla Pastel de champiñones; luego coloque el extremo de la raíz de las semillas germinadas sobre el pastel de champiñones, 1 semilla por pastel finalmente cubra con arena esterilizada; Inocular 3 macetas con cada cepa. Cultivar durante 30 días a 25°C y 14 horas de luz todos los días.

(2) Método de inoculación de arena de maíz: Seleccionar semillas de tamaño uniforme, desinfectarlas con alcohol al 70% durante 7 minutos, lavarlas minuciosamente con agua esterilizada y reservarlas para su uso posterior. Coloque tierra esterilizada en macetas de plástico, luego mezcle el inóculo de arena de maíz cultivado con la tierra esterilizada en una proporción de 1, siembre semillas de trigo en las macetas, siembre 10 granos por maceta y cada cepa Inocula 3 macetas y las condiciones de cultivo. son los mismos que el método de inoculación del pastel de champiñones.

4. Aislar e identificar bacterias patógenas

En el experimento en maceta se investigó la incidencia un mes después de la siembra. Lave el material de las raíces del trigo infectado, séquelo, córtelo en secciones de 3 a 5 mm de largo y desinfecte la superficie. Utilice nitrato de plata (AgNO3) como desinfectante de superficies y los materiales se pueden desinfectar con una solución al 0,1 durante 3 a 5 minutos. Enjuague 3 veces con agua esterilizada, transfiéralo a un plato plano y colóquelo en una incubadora a 25 °C para cultivo. Observe la incidencia de enfermedades del material todos los días. Si descubre que ha crecido micelio en el material, retírelo e insértelo en un solo plato. Después de 5 a 7 días de cultivo, se realizará un examen microscópico para ver si. las bacterias son las mismas que las bacterias originales.

Referencias

[1] Hao Xiangzhi. La pudrición total del trigo y su prevención y control [M]. Shanghai: Shanghai Science and Technology Press, 1982

[2] Sun Hu, Li Honglian, Yuan Hongxia, et al. Identificación y evaluación de la resistencia de diferentes variedades (líneas) de trigo a la enfermedad de pudrición total [J Henan Agriculture Sciences, 2004 (8): 52-54

[3] Xu Lanjie, Nie Zhansheng, Zhan Kehui. Ocurrencia y tecnología de control integral de la enfermedad de pudrición total del trigo en la provincia de Henan [J]. Boletín de ciencia agrícola de Anhui, 2009 (15): 115-117

[4] Xing Caiyun, Hu Rui, Li Yanlun y otros. Estudio experimental sobre el efecto de control de los insecticidas contra la pudrición total del trigo. Actas de la 9.ª Sociedad Provincial de Protección Vegetal de Henan, la 8.ª Sociedad Entomológica Provincial de Henan y la tercera. Congreso de miembros y simposio académico de la Sociedad Provincial de Enfermedades de las Plantas de Henan, 2009 (11): 19