¿Cómo preparar medio LB?
El medio LB (Luria-Bertani) es un medio de cultivo bacteriano de uso común con tres componentes principales: extracto de carne, levadura en polvo y NaCl. La preparación del medio LB es relativamente sencilla, pero es necesario tener en cuenta algunos pasos clave para garantizar la calidad y estabilidad del medio. Los métodos de preparación y las precauciones para el medio LB se presentarán en detalle a continuación.
1. Fórmula del medio LB
La fórmula del medio LB es la siguiente:
Extracto de ternera: 10 g/L
Levadura en polvo: 5 g/L
NaCl: 10 g/L
Agua: 1000 mL
2 Pasos de preparación del medio LB
1. Pese el extracto de carne requerido, la levadura en polvo y el NaCl, agregue aproximadamente 500 ml de agua desionizada y revuelva vigorosamente para disolver completamente.
2. Agregue suficiente agua desionizada para llevar el volumen total a 1000 ml.
3. Vierta la mezcla en un matraz y utilice un esterilizador a presión automático para la esterilización a alta presión. Si no hay un esterilizador automático, también puedes utilizar una olla a presión para la esterilización.
4. Después de la esterilización, coloque el matraz a temperatura ambiente. Después de que el medio de cultivo se enfríe a temperatura ambiente, se puede utilizar o almacenar.
3. Precauciones con el medio de cultivo LB
1. Selección de materiales: La calidad y estabilidad del medio de cultivo LB están relacionadas con las materias primas utilizadas. Por lo tanto, es necesario seleccionar extracto de carne de res, levadura en polvo y NaCl de alta calidad para garantizar la calidad y estabilidad del medio de cultivo.
2. Tiempo de agitación: Durante el proceso de preparación, la mezcla debe agitarse completamente para garantizar que las materias primas se disuelvan por completo. Por lo general, se necesitan entre 10 y 20 minutos para remover hasta que la mezcla se vuelva homogénea.
3. Temperatura y tiempo de esterilización: La esterilización es un paso importante para asegurar la calidad y estabilidad del medio de cultivo. Durante el proceso de esterilización, se debe prestar atención a la temperatura y al tiempo de esterilización. Normalmente se utiliza un autoclave para la esterilización a 121°C durante 20-30 minutos. Si se utiliza una olla a presión para la esterilización, es necesario esterilizarla a 100 °C durante 30 a 60 minutos.
4. Tiempo de enfriamiento: Después de la esterilización, el matraz debe colocarse a temperatura ambiente para que se enfríe a temperatura ambiente antes de su uso o almacenamiento. Si se usa o almacena inmediatamente después de la esterilización, la calidad y estabilidad del medio de cultivo pueden verse afectadas.
5. Condiciones de almacenamiento: El medio LB se puede almacenar a 4°C durante 1-2 meses, o a -20°C durante más de 6 meses. Durante el almacenamiento, se debe tener cuidado de evitar la luz y las vibraciones para no afectar la calidad y estabilidad del medio de cultivo.
En resumen, el medio LB es un medio de cultivo bacteriano de uso común. Su preparación es relativamente sencilla, pero es necesario prestar atención a algunos pasos clave. Durante el proceso de preparación, es necesario seleccionar materias primas de alta calidad, agitar bien la mezcla, esterilizarla correctamente y enfriarla a temperatura ambiente antes de su uso o almacenamiento para garantizar la calidad y estabilidad del medio de cultivo.