Pcr sustantivo explicación bioquímica.
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica de biología molecular que se utiliza para amplificar fragmentos de ADN específicos y puede considerarse como una replicación especial in vitro del ADN. La característica más importante de la PCR es que puede aumentar considerablemente una pequeña cantidad de ADN. Ya sean fósiles de criaturas antiguas, restos de personajes históricos o manchas de cabello, piel o sangre dejadas por el asesino en un caso de asesinato hace décadas.
Siempre que se pueda aislar un poco de ADN, se puede utilizar la amplificación por PCR para comparar. Este es también el poder de las “pruebas de rastreo”. Esta idea fue propuesta por primera vez por Mullis en Estados Unidos en 1983. El método simple de amplificación de ADN fue inventado por Mullis en 1985, lo que significó el verdadero nacimiento de la tecnología PCR. En lo que va de 2013, la PCR se ha convertido en la tecnología de tercera generación.
Conocimiento ampliado:
En 65438-0976, el científico taiwanés Qian Jiayun descubrió la polimerasa TaqDNA estable e hizo una contribución fundamental al desarrollo de la tecnología PCR. La PCR utiliza el ADN para desnaturalizarlo en una sola cadena in vitro a una temperatura alta de 95°C. A baja temperatura (generalmente alrededor de 60°C), los cebadores se combinan con la cadena simple según el principio de emparejamiento de bases complementarias, y luego el ADN. La temperatura se ajusta para permitir la polimerización del ADN. La temperatura de reacción óptima de la enzima (alrededor de 72°C).
La ADN polimerasa sintetiza hebras complementarias en dirección de fosfato a pentasacárido (5’-3’). El instrumento de PCR basado en polimerasa es en realidad un dispositivo de control de temperatura que puede controlar bien la temperatura de desnaturalización, la temperatura de renaturalización y la temperatura de extensión.
Principio de PCR:
La replicación semiconservativa del ADN es una forma importante de evolución y generación biológica. El ADN bicatenario puede desnaturalizarse y desenrollarse en hebras individuales bajo la acción de diversas enzimas. Con la participación de la ADN polimerasa, puede copiarse en dos copias moleculares idénticas basándose en el principio del apareamiento de bases complementarias. Los experimentos han descubierto que el ADN puede desnaturalizarse y fundirse a altas temperaturas, y puede replegarse en dobles hebras cuando se enfría.
Por tanto, la desnaturalización y renaturalización del ADN se puede controlar mediante cambios de temperatura, y la ADN polimerasa y el dNTP pueden completar la replicación in vitro de genes específicos añadiendo cebadores diseñados. Sin embargo, la ADN polimerasa estará inactiva a altas temperaturas, por lo que es necesario agregar una nueva ADN polimerasa en cada ciclo, lo que no solo es engorroso de operar, sino también costoso, lo que restringe la aplicación y el desarrollo de la tecnología de PCR.
El descubrimiento de la enzima ADN polimerasa termoestable Taq supone un hito en la aplicación de la PCR. La enzima puede soportar altas temperaturas superiores a 90°C sin perder actividad y no requiere la adición de enzima para cada ciclo, lo que hace que la tecnología de PCR sea muy simple y reduce en gran medida los costos. La tecnología de PCR se ha utilizado ampliamente y se ha aplicado clínicamente gradualmente.