Lector AID ELISPOT
El ensayo de inmunospot ligado a enzimas (ELISPOT) es un método de detección más sensible en la investigación de inmunología celular. Puede detectar células secretoras de anticuerpos (ASC) y citoquinas (CK) a nivel de células individuales. es más sensible que ELISA y los métodos de dilución limitante, y puede detectar 1 célula que secreta la proteína de 200.000 a 300.000 células. Además, este método puede realizar una detección funcional en células vivas después de la estimulación con antígeno. Tiene alta especificidad, alta confiabilidad intuitiva y es fácil de operar. Se ha utilizado ampliamente en la detección de células CK secretadas o en la determinación de ASC en el país y en el extranjero. Ha ganado una amplia aplicación en la comunidad de inmunología.
Los linfocitos producen localmente citocinas después de ser estimulados por antígenos. Esta citocina es capturada por el anticuerpo monoclonal específico (pre-recubierto) en la membrana de PVDF en la parte inferior de la placa ELISPOT. Después de la eliminación de las células, las citoquinas capturadas se combinan con anticuerpos monoclonales marcados con biotina y posteriormente con fosfatasa alcalina o avidina marcada con peroxidasa de rábano picante. Después de agregar sustrato para el desarrollo del color, la aparición de manchas de color púrpura o marrón rojizo en la membrana de PVDF indica que las células han producido citocinas. Las manchas se cuentan y analizan automáticamente mediante un analizador de inmunomanchas ligado a enzimas (ELISPOT Reader).
La empresa alemana AID se ha centrado en la investigación y el desarrollo de analizadores de inmunomanchas ligados a enzimas durante muchos años. Desde la década de 1990, la empresa AID ha proporcionado una gran cantidad de analizadores de inmunomanchas ligados a enzimas para la investigación científica, clínica y. y laboratorios farmacéuticos de todo el mundo. Analizador de puntos (AID ELISPOT Reader), su aplicación se puede ver en todas partes de la literatura en diversos campos y se ha convertido en una marca reconocida por investigadores científicos de todo el mundo.
El analizador de inmunomanchas ligado a enzimas AID se utiliza para recopilar, contar y analizar de forma totalmente automática las imágenes de manchas de cada pocillo en la placa ELISPOT. No solo puede obtener automáticamente el número de manchas y proporcionar la secreción de citoquinas. valor de actividad, pero también De acuerdo con las reglas de interpretación preestablecidas, los resultados negativos y positivos se obtienen directamente y los resultados se envían a JPG, EXCEL, TXT, PPT, etc. También se puede conectar al sistema LMS del laboratorio para la gestión de datos. y resultados, convirtiéndose en una herramienta de análisis ELISPOT confiable.
Además, el ELISPOT tradicional también tiene limitaciones, al carecer de la detección simultánea de múltiples citocinas producidas por las células T. Para superar este problema, se desarrolló un método de análisis de inmunomanchas fluorescentes (FluoroSpot) basado en el etiquetado fluorescente. Esta nueva tecnología de análisis de inmunomanchas fluorescentes puede detectar linfocitos que expresan múltiples citoquinas a nivel de una sola célula, como las células T que expresan IFN-γ (etiqueta fluorescente verde) e IL-2 (etiqueta fluorescente roja).
Por primera vez, el AID iSpot Reader alemán ha realizado el uso de un analizador de inmunospot ligado a enzimas para realizar análisis ELISPOT tradicionales y Fluorospot de inmunospot fluorescente: AID iSpot Reader analiza el color verde de cada pocillo en de la placa ELISPOT se recopila una imagen de cada uno de los puntos fluorescentes (IFN-γ marcado con FITC) y puntos fluorescentes rojos (IL-2 marcado con Cy3), y las dos imágenes se fusionan utilizando la tecnología de superposición de imágenes de fluorescencia patentada de FluoroAID para garantizar la precisión. del conteo de manchas de tinción.
El analizador de inmunospot ligado a enzimas AID utiliza productos de la sueca Mabtech, un fabricante de reactivos ELISPOT de renombre mundial, y puede usarse para células humanas, de mono, de ratón, de rata y de otras especies, así como en el sector veterinario. campo, para detectar respuestas inmunes de células T/B de ganado vacuno en muestras de ovejas, caballos y cerdos. Además de las series de IFN-γ e interleucina, las citocinas detectables incluyen TNF-α, Perforin, Granzyme B y MIP-1β, etc.
①Humano: apoE, GM-CSF, Granzima B, IFN-α(subt.2, 8, 10, 14, 17), IFN-α(panespecífico), IFN-γ, IL-1β , IL-2, 4, 5, 6, 10, IL-12/-23(p40), IL-12(p70), 13, 17A, 21, 23, 31, MIP-1β, Perforina, TNF-α;
②Mono: IFN-γ, IL-2, IL-17;
③Ratones: GM-CSF, IFN-α, IL-4, 5, 6, IL-12/ -23(p40), IL-13, IL-21, MIP-1β, Perforina, TNF-α, IL-2, IL-17A;
④Otros: Lyme Spot, EBV-. Spot, CMV-Spot, kit Trans Spot;
⑤ Consulte para obtener más kits ELISPOT y Fluoro Spot de células T/células B.
Alta sensibilidad: tasa de detección de 1 célula positiva entre 200.000-300.000
Intuitivo y altamente fiable: detección a nivel de una sola célula, una célula positiva, un punto, el número de puntos; representa el número de células que secretan citocinas y el tamaño del punto representa el nivel de citocinas secretadas por las células;
Alto rendimiento: una placa ELISPOT se puede utilizar para 96 pruebas y los investigadores científicos pueden probar cientos de muestras cada día Sólo una pequeña cantidad de células, como 45 ml de sangre, es suficiente para probar las reacciones de 600 antígenos/péptidos diferentes;
Prueba de función de células vivas: las citocinas detectadas no están presentes ya, sino durante. el proceso de detección es estimulado y secretado por los estimulantes agregados;
Aplicable a experimentos clínicos: las células que han sido criopreservadas y revividas no pierden su función inmune, lo cual es muy importante para las muestras de ensayos clínicos. antes y después del tratamiento. Se realizan pruebas paralelas para que los resultados puedan replicarse; si el ensayo involucra a varias instituciones clínicas, las muestras de sangre se pueden congelar y transportar a un laboratorio central para su análisis.
Además de ser una herramienta de investigación científica, ELISPOT también se utiliza en el diagnóstico clínico. Recientemente se lanzó la primera plataforma de diagnóstico basada en ELISPOT (T-Spot.TB) aprobada por la SFDA. Esta prueba, utilizada para detectar la infección por tuberculosis, detecta respuestas inmunitarias de células T específicas midiendo la secreción de IFN-γ después de la estimulación con antígenos específicos de la tuberculosis. Puede reemplazar las pruebas cutáneas tradicionales al tiempo que mejora en gran medida la sensibilidad y la especificidad, y no se ve afectada por la vacuna BCG. ELISPOT también se puede utilizar para la investigación inmune antiinfecciosa y el diagnóstico de otras enfermedades infecciosas como la hepatitis B, la hepatitis C, el virus de Epstein-Barr, el citomegalovirus, la enfermedad de Lyme, etc.
El método ELISPOT es una herramienta estándar reconocida internacionalmente para detectar y evaluar el nivel de inmunidad celular de las vacunas. El método IFN-γ ELISPOT se usa comúnmente a nivel internacional para monitorear las respuestas inmunes en la investigación de vacunas contra el VIH. El método ELISPOT se usa para evaluar la función de las células T en una gran cantidad de ensayos que monitorean nuevas vacunas candidatas contra el VIH en el Plan de Acción Internacional para la Vacuna contra el SIDA. El método ELISPOT define la eficacia de una vacuna midiendo su capacidad para inducir una fuerte respuesta de las células T. Durante el desarrollo y diseño de la vacuna, el método ELISPOT se puede utilizar para detectar y determinar los epítopos de células T específicos del antígeno. Esta información también se puede utilizar para evaluar estrategias de inmunización y vías inmunitarias apropiadas.
El Instituto Chino para el Control de Productos Farmacéuticos y Biológicos señaló en los "Principios de orientación técnica para la investigación preclínica de vacunas de ADN para uso preventivo" y los "Principios de indicadores técnicos para preparaciones de vacunas vivas que utilizan virus como portadores". para Uso Preventivo” que el método ELISPOT es un método eficaz para detectar y evaluar el título inmunológico celular de las vacunas.
Como método más sensible para detectar la secreción específica de células T/B, la tecnología ELISPOT también es particularmente importante para detectar una pequeña cantidad de células T de memoria específicas de antígeno. Se ha utilizado ampliamente en vacunas preventivas y terapéuticas, como las vacunas contra el SIDA y. Vacunas contra la hepatitis B. Desarrollo y evaluación de vacunas, vacunas contra la influenza y vacunas contra tumores diversos.
En función de las diferentes citoquinas detectadas, ELISPOT puede utilizarse para distinguir diferentes subpoblaciones de células T activadas. Por ejemplo, las células Th1 secretan principalmente IFN-γ, IL-2 y TNF-α, mientras que otras citocinas como IL-4, IL-5 e IL-13 generalmente son secretadas por las células Th2. Un punto importante en la investigación de alergias es el uso de ELISPOT para medir las citoquinas de tipo Th2, porque las reacciones Th2 son las principales reacciones de las alergias, pero generalmente ocurren con bajas frecuencias y requieren métodos altamente sensibles para ser detectadas con éxito.
Monitoreo de las respuestas inmunes de las células T en inmunoterapia para la alergia atópica; en la aplicación de la detección y el diagnóstico in vitro de la alergia de contacto mediada por células, el método ELISPOT ha atraído la atención de cada vez más trabajadores de la alergia. Porque para factores como la IL-4, la principal citoquina de respuesta de tipo Th2, que siempre ha sido difícil de detectar mediante otros métodos como la citometría de flujo y ELISA, la aplicación de métodos ELISPOT altamente sensibles es particularmente importante para estudiar el sistema inmunológico específico de alérgenos. respuestas.
La tecnología de ELISPOT también se utiliza ampliamente en el diagnóstico y la investigación de la etiología de enfermedades autoinmunes, como diabetes tipo I, esclerosis múltiple, miastenia gravis, lupus eritematoso sistémico y otras enfermedades, análisis de etiología, predicción de enfermedades y diagnóstico en etapa temprana. , orientación del tratamiento y análisis del pronóstico, etc.
Aunque ELISPOT se utiliza principalmente para el análisis de células T y B, también es adecuado para cualquier experimento que quiera estudiar la secreción de proteínas a nivel de una sola célula. Este método es particularmente adecuado para experimentos en los que el número de células efectoras es crítico o tiene importancia biológica, como el análisis cuantitativo de monocitos que secretan IL-6 e IL-1β después de la estimulación con LPS de PBMC, además, en células secretoras; También es particularmente aplicable en estudios con números muy pequeños, como las células dendríticas plasmocitoides, que son muy pequeñas en la sangre, pero el IFN-α que secretan después de la activación se puede detectar fácilmente usando ELISPOT.
Por ejemplo
Cribado de fármacos: cribado de compuestos y respuestas inmunológicas a fármacos.
Investigación de inmunidad tumoral: se ha utilizado para analizar y evaluar la inducción de tumores; en pacientes con cáncer Ensayos de vacunas específicas de células T. La detección de niveles específicos de respuesta inmune celular antes y después del tratamiento puede evaluar eficazmente el efecto del tratamiento y proporcionar información de referencia importante para el tratamiento y la medicación.
Investigación sobre la inmunidad al trasplante: predicción del rechazo en el trasplante.
Desde su lanzamiento, más de 1.500 laboratorios en todo el mundo están utilizando el analizador de inmunomanchas ligadas a enzimas de AID. El hardware y el software del lector ELISPOT de AID cumplen totalmente con la certificación CE de la UE, las especificaciones FDA 21CFR parte 11 y los estándares GMP/GLP.
Recopilación y conteo de imágenes puntuales
Lectura de placas completamente automática, recopilación automática de imágenes de cada pocillo, cálculo automático del número de manchas e información relacionada con las manchas, como tamaño, área, densidad óptica, etc. La configuración de parámetros incorporada para diferentes factores se puede llamar directamente; la función CountAID ayuda a optimizar la lectura de parámetros y tiene una función de memoria de parámetros inteligente.
Análisis de resultados
Determine directamente los resultados negativos y positivos de las pruebas. El módulo de diagnóstico AIDiagnostic es adecuado para la interpretación de los resultados de los experimentos ELISPOT para el diagnóstico clínico y genera individualmente imágenes puntuales e informes de resultados. para cada paciente; analizar la distribución de manchas en cada pocillo, comparar la intensidad de las respuestas inmunes, cuantificar la secreción de citocinas, etc.
Salida de datos y control de calidad
Se pueden generar imágenes de un solo pocillo, de pocillos arbitrarios y de placas completas; se pueden guardar múltiples formatos, datos de salida de Excel, Txt, PPT, etc.; personalizado para incluir número de puntos, SFU, intensidad de densidad óptica, actividades, gráfico de distribución de puntos, etc., incluye módulo de control de calidad, registro automático del historial de operaciones y cumple con las normas GLP.
Análisis ELISPOT bicolor fluorescente - FluoroS pot, utiliza tecnología patentada de superposición de imágenes de fluorescencia para garantizar una identificación precisa de los puntos de secreción de factor multicolor, evitando errores debido a la secreción desigual de diferentes citocinas en dos-colores marcados con enzimas. La detección de color provocó errores de juicio. Rueda de filtros de 4 a 8 posiciones, conmutación completamente automática, al menos filtros de fluorescencia FITC y Cy3 estándar, se pueden agregar otras longitudes de onda.
Interpretación totalmente automática
iSpot genera imágenes de puntos fluorescentes de varios colores en cada pocillo de la placa, como la detección de la secreción de IFN-γ marcada con FITC y la secreción de IL-2 marcada con Cy3. Según Según la situación, el software superpondrá diferentes imágenes de fluorescencia por sí solo para identificar con precisión las células secretoras de tumores (IFN-γamp; IL-2). Todo el proceso está totalmente automatizado y no requiere intervención manual.
Rendimiento estable, buena compatibilidad y escalabilidad
La excitación de alta energía garantiza una detección de señal de fluorescencia débil, los filtros de banda estrecha garantizan una detección de señal específica y la expansión multicolor solo requiere la adición de filtros.
Avance tecnológico
El primer analizador puntual ligado a enzimas que se lanzó en el mundo. En 1996, inventó la patente para la "Aplicación del método ELISPOT para detectar la actividad de las células sanguíneas"; el único con "Uso de filtros de fluorescencia" Basado en el sistema de detección ELISPOT patentado PCT/EP2008/009112-FluoroAID para fluorescencia multicolor.
Publicación académica autorizada
Desde el lanzamiento del modelo fluorescente en 2007 hasta ahora, la AID ha publicado el 80% de la literatura de SCI sobre aplicaciones ELISPOT fluorescentes y está reconocida como una mejor opción para la detección de fluorescencia.
Altamente reconocido internacionalmente
Desarrollado en estrecha colaboración con el Laboratorio de Inmunología de Oxford de la Universidad de Oxford, es una herramienta especial para el diagnóstico de tuberculosis por T-Spot Marca internacional designada por SIDA; el Vaccine Action Group (IAVI); la marca exclusiva de laboratorios de desarrollo de kits ELISPOT de renombre mundial (como el sueco Mabtech).
Para solicitar el uso de prueba del analizador de inmunomanchas ligado a enzimas de la AID, contáctenos al 13521452266
——Agente de primer nivel de la AID alemana en China, Zeping, Beijing