¿Los anticuerpos occidentales se seleccionan en función de las especies?

Hay muchos tipos de anticuerpos de referencia internos, como β-actina, β-tubunlina, GAPDH, Lamin B, etc. Entonces, ¿cómo debemos elegir para nuestros propios experimentos? La siguiente es una breve introducción. los principios que se deben seguir al seleccionar los anticuerpos de referencia internos:

1. Fuente de la especie de muestra:

Lo primero a considerar es la especie de la que proviene la muestra experimental.

1. Para muestras de tejido o células de mamíferos, se suelen seleccionar β-actina, β-tubulina, GAPDH, Lamin B, Histona H3, Na,K atpasa, etc.

2. Para muestras experimentales derivadas de plantas, se puede elegir plantactina, Rubisco, etc.

3. Existen pocos estudios sobre muestras de otras fuentes, por lo que se debe consultar los informes de la literatura para seleccionar las proteínas apropiadas como controles internos.

2. Peso molecular de la proteína diana:

A la hora de seleccionar anticuerpos de referencia internos, se debe considerar el peso molecular de la proteína diana. Generalmente, se debe garantizar que la diferencia de peso molecular entre la proteína objetivo y la proteína de referencia interna sea superior a 5 kD. Por ejemplo, si el peso molecular de la proteína objetivo es 45 KD, no es apropiado seleccionar β-actina como referencia interna. En su lugar, puede considerar seleccionar GAPDH o β-tubulina como referencia interna.

3. Sitio de expresión de la proteína diana:

Para la detección general de proteínas, los anticuerpos β-actina, β-tubulina, etc. son suficientes, pero para la cuantificación de proteínas nucleares, especialmente cuando la proteína de la muestra es una proteína nuclear, elegir una referencia interna de proteína nuclear adecuada puede reflejar mejor el valor de la referencia interna. Los anticuerpos de referencia nucleares comúnmente utilizados incluyen Lamin A, Lamin B e Histona H3. Además, otros anticuerpos de referencia de proteínas nucleares comunes incluyen PCNA, K70, K80, etc. En algunos informes de la literatura, Erk2, proteína de unión a TATA (TBP) y c-. Se utilizan Jun, c-Fos, etc. Para la detección de proteínas de membrana, el anticuerpo de referencia interno comúnmente utilizado es Na,K ATPasa. Para la detección de proteínas mitocondriales, se utilizan habitualmente VDAC1 y COX IV como anticuerpos de referencia interna.

Los principios anteriores son solo para situaciones normales, pero el problema que necesita atención es que la selección de la referencia interna debe considerar el entorno experimental real, por ejemplo, en algunas células, hipoxia tisular, diabetes y otras. factores pueden causar que la expresión de GAPDH aumente y no es adecuado como referencia interna. Por ejemplo, en experimentos que involucran proliferación celular, c-Jun no es adecuado como referencia interna debido a cambios en su propia expresión y en experimentos de apoptosis, TBP, Lamin, etc. no son adecuados como controles internos; Por lo tanto, estos factores deben considerarse al diseñar el plan experimental y se debe consultar la literatura correspondiente. Durante el experimento, también se debe prestar atención a si la expresión de la referencia interna es anormal, se debe tener en cuenta este factor.