¿Cuál es el principio de la PCR?
El principio básico de la tecnología PCR es similar al proceso de replicación natural del ADN, y su especificidad se basa en cebadores oligonucleotídicos que son complementarios a ambos extremos de la secuencia objetivo. La replicación semiconservadora del ADN es una vía importante para la evolución y generación biológica.
El ADN bicatenario puede desnaturalizarse y desenrollarse en hebras individuales bajo la acción de diversas enzimas. Con la participación de la ADN polimerasa, puede copiarse en dos copias moleculares idénticas según el principio del apareamiento de bases complementarias. .
En experimentos, se descubrió que el ADN puede desnaturalizarse y descomprimirse a altas temperaturas, y puede renaturalizarse en dobles hebras cuando se reduce la temperatura. Por lo tanto, al controlar la desnaturalización y renaturalización del ADN mediante cambios de temperatura, agregando cebadores diseñados, ADN polimerasa y dNTP, se puede completar la replicación in vitro de genes específicos.
Información ampliada:
La cantidad de producto de PCR generado aumenta exponencialmente y puede amplificar la plantilla inicial que se va a probar en el orden de picogramos (pg=10-12) a microgramos. (μg=-6) nivel. Puede detectar una célula objetivo de 1 millón de células; en la detección de virus, la sensibilidad de la PCR puede alcanzar 3 RFU, la tasa de detección mínima es de 3 bacterias;
La unión de los cebadores a las plantillas y la extensión de las cadenas de los cebadores siguen el principio de apareamiento de bases. La fidelidad de la reacción de síntesis de la polimerasa y la resistencia a altas temperaturas de la TaqDNA polimerasa permiten que la unión (renaturalización) de plantillas y cebadores en la reacción se realice a temperaturas más altas.
La especificidad de unión aumenta considerablemente y los fragmentos del gen diana amplificados pueden mantener una alta precisión. Al seleccionar regiones genéticas objetivo con alta especificidad y conservación, el grado de especificidad será aún mayor.