Después de transfectar células con el plásmido psiCHECK-2, ¿qué fármaco se debe utilizar para detectar clones estables?

La transfección de plásmidos con genes knockout puede construir líneas celulares estables

Una es seleccionar líneas celulares monoclonales estables después de la transfección de liposomas y la otra es utilizar retrovirus, transfección lentiviral y detección de células estables. líneas.

Transfección con lipofectamina: 24 horas después de la transfección, digerir las células y contarlas en una placa de 96 pocillos, asegurándose de que cada pocillo tenga de 2 a 3 células, para obtener una sola. clonar después de que las células se adhieran a la pared, agregue antibióticos para la detección. El tiempo de detección y la concentración dependen de las células. Generalmente, el G418 actúa durante una semana y la puromicina tarda de 2 a 3 días.

El liposoma. Este método lleva mucho tiempo para detectar monoclones y la eficiencia es baja, alrededor de 1.

Transfección viral: primero, se usan células empaquetadoras, generalmente 293 células, para empaquetar el virus, y luego se usa el virus. para la transfección. El empaquetado de las células objetivo depende de los diferentes tipos de virus y generalmente demora entre 3 y 5 días. Se debe medir el título del virus empaquetado y se determina la cantidad de virus que se transfectará en las células objetivo. el título de las células diana 1-2 Agregue antibióticos para detectar y obtener líneas celulares estables.

La eficiencia de la transfección de virus para obtener líneas celulares estables es alta, pero los pasos son engorrosos.