Reactivos y equipos para secuenciadores de ADN

1. El reactivo principal del kit de reacción de secuenciación bigdye es la mezcla bigdye, que contiene ddntp patentado de PE de cuatro colores marcado fluorescentemente y dntp ordinario, adn polimerasa amplitaq fs, tampón de reacción, etc.

2. Plantilla de control de ADN bicatenario pgem-3zf (+) 0,2 g/l, reactivos de soporte del kit.

3． m13(-21) cebador tgtaaaacgacggccagt, 3,2μmol/l, es decir, 3,2pmol/μl, reactivo de soporte del kit.

4. Las plantillas de secuenciación de ADN pueden ser productos de PCR, ADN monocatenario, ADN plasmídico, etc. La concentración de la plantilla debe ajustarse a 1 µl durante la reacción de PCR. La concentración de ADN plasmídico medida en este experimento es de 0,2 g/l, es decir, 200 ng/μl.

5. Cebadores: los cebadores directos o inversos deben diseñarse de acuerdo con el fragmento de ADN que se va a medir y prepararse a 3,2 μmol/l, es decir, 3,2 pmol/μl. Si el plásmido recombinante contiene una secuencia de cebador universal, también se pueden usar cebadores universales, tales como el cebador m13(-21), el cebador t7, etc.

6． Agua desionizada esterilizada o agua triple destilada.

7. 0,2ml o separado de la tapa del tubo PCR de 0,5ml, producto de la empresa PE.

8,3mol/l acetato de sodio (ph5,2) Pesar 40,8g naac·3h2o y disolverlo en 70ml de agua destilada, ajustar el pH a 5,2 con ácido acético glacial, diluir a 100ml, autoclave y luego envasar .

9. Etanol 70% y etanol absoluto.

10. Mezcla de Naac/etanol: Tome 37,5 ml de etanol absoluto y 2,5 ml de 3 mol/l de naac y mézclelos bien. Se puede almacenar a temperatura ambiente durante 1 año.

11． Producto abi gel de secuenciación pop 6.

12． Productos abi del reactivo de supresión de plantilla (tsr).

13. Producto abi tampón de electroforesis 10×.

14. Secuenciador de ADN completamente automático abi prism 310.

15. Instrumento PCR tipo 2400 o 9600.

16. Centrífuga refrigerada de alta velocidad de sobremesa.

17． Centrífuga de mesa de alta velocidad o centrífuga de bolsillo.