¿A qué se debe prestar atención cuando jc-1 detecta el potencial de membrana mitocondrial?

1) Principio: JC-1 es una sonda fluorescente ideal ampliamente utilizada para detectar el potencial de membrana mitocondrial (potencial de membrana mitocondrial) ΔΨm. Cuando el potencial de membrana mitocondrial es alto, JC-1 se agrega en la matriz mitocondrial para formar agregados J, que pueden producir fluorescencia naranja; cuando el potencial de membrana mitocondrial es bajo, JC-1 no puede agregarse en la matriz mitocondrial, JC. -1 es un monómero en este momento y puede producir fluorescencia verde. Esto hace que sea muy conveniente detectar cambios en el potencial de la membrana mitocondrial a través de cambios en el color de la fluorescencia. La proporción relativa de fluorescencia roja y verde se usa comúnmente para medir la proporción de despolarización mitocondrial.

(2) Materiales e instrumentos

JC-1 se adquirió de Sigma Company con un peso molecular de 652,23. Se disolvió en DMSO con una concentración de almacenamiento de 5 mg/ml y. la concentración final se diluyó a 10 µg/ml; microscopio de fluorescencia, lector de microplacas fluorescentes multifuncional

(3) Pasos

① Inocular células: placa de 96 pocillos, con el número. de células inoculadas por pocillo 15.000 o tapa incorporada. La placa de 24 pocillos del portaobjetos tiene 90.000 células por pocillo.

② Tratamiento: 24 horas después de la inoculación, lavar dos veces con solución azucarada de Earle y dar el tratamiento correspondiente (estrés oxidativo o fármacos).

③ Incubación JC-1: lavar una vez con solución de Sugar Earle y reemplazar con una incubadora JC-1 con una concentración final de 10 µg/ml e incubar durante 20 minutos.

④ Detección: Lave dos veces con solución azucarada de Earle. El cubreobjetos se puede usar para detectar cambios de fluorescencia bajo un microscopio de fluorescencia. La placa de 96 pocillos se usa para detectar el valor de fluorescencia con un lector de microplacas fluorescentes multifuncional. la luz de excitación se establece en 488 nm, la luz de emisión se establece en 530 nm cuando se detecta polímero JC-1, la luz de excitación se establece en 529 nm y la luz de emisión se establece en 590 nm.

(4) Notas

Al diluir JC-1 rápidamente, de lo contrario es fácil de agregar y difícil de disolver, se recomienda utilizar el kit de detección de potencial de membrana mitocondrial JC-1 de Biyuntian.