Examen de calificación de técnico de laboratorio 2017 Consolidación de conocimientos: detección de bacterias y antígenos
(1) Microscopía de frotis directa
El uso de frotis directamente de muestras de pacientes para la microscopía de tinción es un método sencillo y rápido. Recolecte muestras de un sitio determinado para su examen directo, teniendo en cuenta las características morfológicas de las bacterias y el posible número de bacterias. Los frotis de punción del líquido cefalorraquídeo y las equimosis en pacientes con meningitis a menudo revelan nefrococos gramnegativos intracelulares, que tienen valor diagnóstico.
En el frotis de pseudomembrana faríngea de pacientes con difteria se pueden observar bacilos típicos y, en ocasiones, pueden estar presentes partículas metacromáticas, lo que también tiene valor diagnóstico de referencia. La detección de Mycobacterium tuberculosis mediante tinción acidorresistente del esputo de pacientes con tuberculosis directamente o después de su concentración en frotis tiene valor diagnóstico. En casos raros, también se utiliza la inmunofluorescencia o la microscopía de tinción con anticuerpos marcados con enzimas para un diagnóstico rápido, como Vibrio cholerae y Shigella disenteriae en muestras de heces, que pueden detectarse mediante esta técnica.
(2) Cultivo
La mayoría de las bacterias no tienen características en morfología y tinción, por lo que es necesario un cultivo para aislar e identificar las bacterias. Este método requiere mucho tiempo pero es confiable.
Además, sólo a través de este método se pueden obtener cultivos puros de bacterias, que pueden usarse para pruebas de susceptibilidad a medicamentos o pruebas de toxicidad. Las bacterias deben identificarse inicialmente en función de su nutrición, condiciones de crecimiento (como anaeróbicas o CO2) y características de crecimiento de las colonias. Si los estreptococos hemolíticos necesitan crecer en placas de agar sangre, las colonias serán pequeñas y transparentes, y habrá un círculo de hemólisis completo alrededor de las colonias, que puede usarse para la identificación. La mayoría de las bacterias necesitan ser cultivadas e inoculadas en varios medios de cultivo especiales para realizar pruebas de reacciones bioquímicas o para determinar su antigenicidad y patogenicidad.
(3) Reacciones bioquímicas
En el proceso de síntesis y catabolismo bacteriano, algunas sustancias pueden ser utilizadas o descompuestas por enzimas. Diferentes bacterias tienen diferentes enzimas, por lo que las sustancias que cada bacteria puede usar y descomponer también son diferentes. Utilizar las diferentes reacciones bioquímicas de varias bacterias para ayudar a identificarlas es un paso importante para algunas bacterias como las Enterobacteriaceae. Por ejemplo, las enterobacterias son todos bacilos gramnegativos. La morfología de las colonias es similar, pero los resultados de la fermentación del azúcar son diferentes, lo que se puede distinguir utilizando diferentes tipos de azúcar como sustratos de cultivo para reacciones bioquímicas.
(4) Detección y análisis de antígenos
Algunas bacterias son difíciles de distinguir incluso mediante reacciones bioquímicas, pero sus componentes antigénicos bacterianos (incluidos los antígenos bacterianos y los antígenos flagelares) son diferentes. La cepa o tipo puede determinarse utilizando anticuerpos específicos conocidos para determinar la presencia o ausencia del antígeno bacteriano correspondiente.
El método más utilizado es la reacción de aglutinación en porta. Utilice suero inmunológico específico conocido para realizar la reacción de aglutinación con las bacterias que se identificarán en el portaobjetos. Si aparecen colonias aglutinadas, es positivo, lo que indica que las bacterias tienen los antígenos específicos correspondientes. En los últimos años, se han utilizado varios métodos sensibles para detectar antígenos, como la inmunoelectroforesis convectiva, el radioinmunoensayo, el inmunoensayo enzimático y la cromatografía de gases, en un intento de detectar antígenos bacterianos directamente a partir de muestras de pacientes para un diagnóstico rápido.
Por ejemplo, en la meningitis bacteriana, se pueden detectar neumococos, meningococos y bacilos de la gripe en el líquido cefalorraquídeo mediante inmunoelectroforesis convectiva con alta especificidad y sensibilidad. La serie de métodos de cromatografía de gases utiliza ácidos orgánicos volátiles de cadena corta producidos por el metabolismo bacteriano para identificar bacterias mediante análisis de cromatografía de gases y se usa ampliamente en bacterias anaeróbicas.
Otro beneficio de la detección de antígenos es que después del tratamiento con antibióticos, se inhibe el crecimiento de bacterias que no pueden detectarse mediante métodos de cultivo aún pueden detectarse en poco tiempo debido a la presencia de antígenos, lo que ayuda. Para aclarar la causa. En algunos casos, los fagos también se pueden utilizar para analizar tipos de antígenos bacterianos para investigaciones de seguimiento epidemiológico.